白黎蘆醇(Resveratrol)對(duì)食管癌Ec109細(xì)胞生物學(xué)作用的初步研究.pdf

1、【背景及目的】
　　白藜蘆醇(Resveratrol,Res)化學(xué)名為3,5,4.-三羥基-1,2-二苯乙烯,是存在于葡萄皮、花生、紅酒中的一種植物多酚類物質(zhì),具有廣泛的生物活性和藥理活性。研究認(rèn)為Res是一種重要的心血管保護(hù)因子,具有抗氧化,調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝,抑制低密度脂蛋白的氧化、減少花生四烯酸的產(chǎn)生、抑制血小板聚集等功能。最近的研究發(fā)現(xiàn)Res還是重要防癌因子,體外實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)Res可通過(guò)干預(yù)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)、影響細(xì)胞周期蛋白的表

2、達(dá)等途徑而誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡。本文旨在研究白藜蘆醇對(duì)人食管癌EC109細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制、凋亡誘導(dǎo)作用,并初步探討白藜蘆醇對(duì)食管癌細(xì)胞的作用機(jī)制,以期為臨床改善食管癌的治療現(xiàn)狀提供理論依據(jù)。
　　【材料和方法】
　　用不同濃度的白藜蘆醇處理人食管癌EC109細(xì)胞,通過(guò)MTT法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)EC109細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用;倒置相差顯微鏡和Hoechest33258熒光染色觀察 EC109細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;DNA瓊脂糖凝膠電泳分析

3、細(xì)胞凋亡;透射電鏡觀察白藜蘆醇作用后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白藜蘆醇作用后的細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡;Western Blot檢測(cè)白藜蘆醇作用后AnnexinⅠ蛋白表達(dá)量的變化情況。
　　【結(jié)果】
　　白藜蘆醇能夠抑制EC109細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖,并呈時(shí)間和劑量依賴性;500μmol/L Res作用48h后,倒置相差顯微鏡及熒光顯微鏡觀察均可見凋亡細(xì)胞的典型形態(tài)學(xué)變化;瓊脂糖凝膠電泳顯示500μmol/L Res處理組出

4、現(xiàn)明顯的DNA梯形帶;經(jīng)白藜蘆醇處理的EC109細(xì)胞可見細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變:細(xì)胞表面絨毛突起減少,胞質(zhì)內(nèi)空泡化及染色質(zhì)邊集等凋亡形態(tài)的改變;白藜蘆醇能夠影響EC109細(xì)胞的細(xì)胞周期分布,使細(xì)胞周期阻滯于S期,G0/G1期細(xì)胞數(shù)量減少;125、250、500μmol/L Res處理組出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰;Western Blot檢測(cè)顯示經(jīng)白藜蘆醇處理0、1、3、6、12、24、48h的EC109細(xì)胞,其AnnexinⅠ/β-actin光密

5、度積分值之比分別為0.1514、0.2019、1.2877、1.3263、1.8854、1.9585、2.0457,說(shuō)明白藜蘆醇增強(qiáng)AnnexinⅠ蛋白的表達(dá)。
　　【結(jié)論】
　　白藜蘆醇能夠抑制EC109細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖,其抑制作用呈劑量和時(shí)間依賴性。白藜蘆醇可以使EC109細(xì)胞周期阻滯于S期,抑制細(xì)胞DNA合成,并且這種作用呈劑量依賴性。白藜蘆醇可誘導(dǎo)EC109細(xì)胞發(fā)生凋亡改變。白藜蘆醇能夠上調(diào)EC109細(xì)胞Annexi