P2Y受體激發(fā)HIF-1活性并對小鼠成神經(jīng)細胞瘤細胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細胞生長的影響機制.pdf

1、目的：研究P2Y嘌呤受體在小膠質(zhì)細胞和成神經(jīng)細胞瘤細胞中對缺血誘導(dǎo)因子1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）的作用。
　　方法：
　　1.細胞培養(yǎng)，BV-2小鼠小膠質(zhì)細胞和Neuro2a小鼠成神經(jīng)細胞瘤細胞在加有10％牛胎血清的DMEM細胞培養(yǎng)液中，37℃，5%二氧化碳潮濕的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)、RNA干擾技術(shù)、蛋白印跡技術(shù)和熒光素酶報告基因技術(shù)檢測HIF-1及其

2、應(yīng)答基因mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達，并利用不同蛋白激酶特異性抑制劑，觀察HIF-1表達與相關(guān)信息傳導(dǎo)通路之間的關(guān)系，采用MTT法和3H-TdR摻入法檢測小鼠成神經(jīng)細胞瘤細胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細胞中DNA合成和細胞增殖。
　　結(jié)果：
　　1．UTP時間依賴性的激活HIF-1蛋白表達，但對HIF-1α mRNA轉(zhuǎn)錄沒有影響，說明其調(diào)控是在轉(zhuǎn)錄后和/或翻譯水平上進行的。
　　2．UTP時間依賴性的激活HIF-1應(yīng)答基因VEGF和GLU

3、T1 mRNA轉(zhuǎn)錄。
　　3．HIF-1表達上調(diào)與PLC/PKC/[Ca2+]、PI3K/AKT/mTOR和ERK1/2信息通路的激活有關(guān)。
　　4．PI3K/AKT/mTOR、ERK1/2信息通路的激活與EGFR轉(zhuǎn)錄激活有關(guān)，后者激活又涉及c-Src和NADPH氧化酶信息通路。
　　5．HIF-1在UTP誘導(dǎo)的小鼠成神經(jīng)細胞瘤細胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細胞中DNA合成與細胞增殖中起重要作用。
　　結(jié)論：在小膠質(zhì)細胞和成神