高動力性肺動脈高壓大鼠肺動脈內(nèi)源性NO-ET體系的變化及霧化吸入硝酸甘油對其干預(yù)作用的研究.pdf

1、第一部分：高動力性肺動脈高壓大鼠模型的建立 研究目的 本研究的目的旨在探討建立大鼠肺動脈高壓模型的方法，為研究兒科領(lǐng)域左向右分流型CHD高動力性肺動脈高壓的機制及其干預(yù)措施奠定基礎(chǔ)。 材料與方法 健康雄性SD大鼠20只，隨機分成兩組，每組10只。分流組(S組)應(yīng)用腹主動脈-下腔靜脈造瘺術(shù)造成左向右的血液分流，引起肺循環(huán)的血量增加。對照組(C組)僅打開腹腔暴露腹主動脈及下腔靜脈而不實行分流手術(shù)。手術(shù)結(jié)束后，

2、兩組大鼠在相同的條件下飼養(yǎng)至12周。12周后，應(yīng)用超聲心動圖紀(jì)錄二、三尖瓣返流情況，應(yīng)用多普勒超聲心動圖測量肺動脈瓣口血流速度(PV)、血流加速時間(AT)及右室射血前時間(RPEP)，并計算RPEP／AT。應(yīng)用導(dǎo)管測壓方法，測量右室收縮期壓力(RVSP)。分離大鼠左心室(LV)、右心室(RV)及室間隔(S)，并分別稱重，計算RV／(LV+S)。 結(jié)果 1．與C組比較，S組大鼠術(shù)后12周食欲明顯減退，體重增長減慢，兩組差

3、異有顯著意義(P

4、mmHg)顯著高于C組(21．30-2：4．89)(P<0．01)；RV／(LV+S)比值(0．273~0．023)顯著高于C組(0．218±0．012)(P<0．01)。 結(jié)論 腹主動脈一下腔靜脈分流術(shù)可成功地制造血流動力學(xué)改變類似左向右分流先天性心臟病合并肺動脈高壓大鼠模型；經(jīng)胸右心室穿刺測壓可以方便、準(zhǔn)確地測量和監(jiān)測右心室壓力。 第二部分：高動力性肺動脈高壓大鼠內(nèi)源性一氧化氮及內(nèi)皮素體系的變化 研究

5、目的 利用高動力性肺動脈高壓動物大鼠模型，觀察NO／ET體系的相關(guān)指標(biāo)，以期了解高動力性肺動脈高壓時內(nèi)源性NO／ET體系的變化情況和二者之間的相互聯(lián)系。 材料與方法 動物分組及血流動力學(xué)檢測指標(biāo)同第一部分。分離大鼠左心室(LV)、右心室(RV)及室間隔(S)，并分別稱重，計算RV／(LV+S)。以放射免疫法測定血漿內(nèi)皮素-1(ET-1)水平。分光光度計測定血漿NO代謝產(chǎn)物含量。肺組織灌流固定，切片蘇木精一伊紅(H

6、E)染色，按照Heath-Edwards高壓性肺血管疾病病理學(xué)分級給予病理評分。分別測定肺中、小動脈外徑、管壁厚度、血管總面積。計算管壁厚度占外徑百分比(vascularwallthinkness／vasculardiameter,WT／D)、管壁面積占血管總面積百分比(vasculararea／totalvasculararea，WA％)。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(IHC)法檢測ETA受體(ETAR)、ETB受體(ETBR)及內(nèi)皮型一氧化氮

7、合酶(eNOS)在肺血管上皮及平滑肌上的表達(dá)。 結(jié)果 1．S組血漿ET-1含量(49．95+5．05pg／m1)顯著高于C組(22．94±5．15pg/ml)(P<0．01)，血漿NO代謝產(chǎn)物測值(29．56±5．61~tmol／L)高于C組(21．83~5．54gmol／L)(P=0．03)。 2．肺組織切片HE染色可見S組肺中小動脈出現(xiàn)明顯的內(nèi)膜增生，肌層增厚，血管平滑肌細(xì)胞排列紊亂等肺動脈高壓病理改變，其病

8、理分級(3．40)明顯高于C組(0．87)，差異有顯著性(P<0．01)。WT／D及WA％兩個表示肺血管肌化程度的指標(biāo)S組(WT／D10．21±0．83％，WA％22．34±2．51％)均顯著高于C組(WT／D5．33±0．47％，WA％14．01±1．03％)(P<0．01)。 3．免疫組織化學(xué)顯示，S組TA受體(ETAR)、ETB受體(ETBR)及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)在肺血管的表達(dá)(ETAR84．68±8．46，E

9、TBR84．54±7．71，eNOS44．87±9．1)均強于C組(ETAR33．51±4．03，ETBR32．71±2．94，eNOS32．01±4．11)差異有顯著性(P<0．01)。 結(jié)論 1．高動力性肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展過程中，NO／TE體系均呈現(xiàn)上調(diào)。 2．ET體系的上調(diào)是血流動力學(xué)改變后肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展最重要的起始因素，ETAR、ETBR均對肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展過程起到了促進(jìn)作用。 3．內(nèi)源性

10、NO體系的上調(diào)繼發(fā)于ET體系的改變，但仍不能維持NO／ET之間的平衡關(guān)系． 第三部分：霧化吸入硝酸甘油對高動力性肺gJ脈高壓的預(yù)防和治療作用及其機制 研究目的 觀察NTG霧化吸入是否能降低肺動脈高壓，起到預(yù)防或緩解肺血管重構(gòu)，為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 材料與方法 健康雄性SD大鼠40只，隨機分成四組，每組lO只。其中三組實施腹主動脈一下腔靜脈造瘺術(shù)造成左向右的血液分流者分別包括：分流組(S組)，分流a

11、組(Sa組)，分流b組(Sb組)；而對照組(C組)僅打開腹腔暴露腹主動脈及下腔靜脈而不實行分流手術(shù)。 Sa組術(shù)后第2天開始給予硝酸甘油霧化吸入，每日1次，每次20分鐘，共8周，然后生理鹽水霧化吸入4周，每日1次，每次20分鐘。 Sb組術(shù)后第2天給予生理鹽水霧化吸入，每日1次，每次20分鐘；8周后給予硝酸甘油霧化吸入，一日2次，每次20分鐘，共4周。 S組術(shù)后第2天給予生理鹽水霧化吸入，每日1次，每次20分鐘，共1

12、2周。 C組為正常對照，術(shù)后第2天給予生理鹽水霧化吸入，每日1次，每次20分鐘。 結(jié)果 1．造模12周后超聲心動圖顯示，Sa組大鼠及Sb組大鼠三尖瓣返流及肺動脈瓣返流的發(fā)生率均明顯低于S組(P<0．01)，同C組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)。Sa組的PV及RPEP／AT比值分別為0．77~0．08rn／s和0．60~0．06；Sb組的PV及RPEP／AT比值分別為0．80~0．08m／s和0．67±0．0

13、6，均顯著低于S組的PV及RPEP／AT比值(0．834-0．08m／s及0．80+0．03)(P<0．05)。 2．Sa組和Sb組RVSP分別為23．56~2．83mmHg和21．70~2．94mmHg，顯著低于S組(28．63~2．91mmHg)(P<0．01)。Sa組RV／(V+S)比值(0．221~0．014)顯著低于S組(0．273~0．023)(P<0．01)。Sb組平均值(0．250~0．018)低于S組，但差異無

14、統(tǒng)計學(xué)意義。Sa組、Sb組、S組之間頸動脈平均壓(MAP)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0．05)。 3．Sa組的血漿ET-1含量及NO代謝產(chǎn)物測值分別為38．16±9．98pg/ml和23．00~6．841xmol／L：Sb組的血漿ET-1含量及NO代謝產(chǎn)物測值分別為22．66+5．81pg/ml和16．08~2．33gmol／L，均低于S組的血漿ET-1含量及NO代謝產(chǎn)物測值(分別為49．95~5．05pg／ml和29．56~5．61g

15、mol／L)(P<0．01)。MetHb含量四組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 4．肺組織切片HE染色顯示，按照評分由低到高的組依次為：C組(0．87)

16、T／D10．21±0．83％．WA％22．34±2．51。說明Sa組肌化程度明顯小于Sb組及S組(P

17、中Sa組ETBR表達(dá)低于Sb組，差異有顯著性(P<0．05)。 6．Sa組、Sb組、S組內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表達(dá)積分分別為47．79~15．29、48．39~1．73和44．87~9．1，三組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0．05)。 結(jié)論 1．長期小劑量霧化吸入NTG可以明顯降低高分流組肺動脈壓力，而不影響體循環(huán)壓力。 2．長期小劑量霧化吸入NTG可改善高分流組肺血管重建。早期應(yīng)用對肺血管的保護(hù)作用