高動力性肺動脈高壓大鼠肺動脈內源性NO-ET體系的變化及霧化吸入硝酸甘油對其干預作用的研究.pdf

1、第一部分：高動力性肺動脈高壓大鼠模型的建立 研究目的 本研究的目的旨在探討建立大鼠肺動脈高壓模型的方法，為研究兒科領域左向右分流型CHD高動力性肺動脈高壓的機制及其干預措施奠定基礎。 材料與方法 健康雄性SD大鼠20只，隨機分成兩組，每組10只。分流組(S組)應用腹主動脈-下腔靜脈造瘺術造成左向右的血液分流，引起肺循環(huán)的血量增加。對照組(C組)僅打開腹腔暴露腹主動脈及下腔靜脈而不實行分流手術。手術結束后，

2、兩組大鼠在相同的條件下飼養(yǎng)至12周。12周后，應用超聲心動圖紀錄二、三尖瓣返流情況，應用多普勒超聲心動圖測量肺動脈瓣口血流速度(PV)、血流加速時間(AT)及右室射血前時間(RPEP)，并計算RPEP／AT。應用導管測壓方法，測量右室收縮期壓力(RVSP)。分離大鼠左心室(LV)、右心室(RV)及室間隔(S)，并分別稱重，計算RV／(LV+S)。 結果 1．與C組比較，S組大鼠術后12周食欲明顯減退，體重增長減慢，兩組差

3、異有顯著意義(P

4、mmHg)顯著高于C組(21．30-2：4．89)(P<0．01)；RV／(LV+S)比值(0．273~0．023)顯著高于C組(0．218±0．012)(P<0．01)。 結論 腹主動脈一下腔靜脈分流術可成功地制造血流動力學改變類似左向右分流先天性心臟病合并肺動脈高壓大鼠模型；經胸右心室穿刺測壓可以方便、準確地測量和監(jiān)測右心室壓力。 第二部分：高動力性肺動脈高壓大鼠內源性一氧化氮及內皮素體系的變化 研究

5、目的 利用高動力性肺動脈高壓動物大鼠模型，觀察NO／ET體系的相關指標，以期了解高動力性肺動脈高壓時內源性NO／ET體系的變化情況和二者之間的相互聯(lián)系。 材料與方法 動物分組及血流動力學檢測指標同第一部分。分離大鼠左心室(LV)、右心室(RV)及室間隔(S)，并分別稱重，計算RV／(LV+S)。以放射免疫法測定血漿內皮素-1(ET-1)水平。分光光度計測定血漿NO代謝產物含量。肺組織灌流固定，切片蘇木精一伊紅(H

6、E)染色，按照Heath-Edwards高壓性肺血管疾病病理學分級給予病理評分。分別測定肺中、小動脈外徑、管壁厚度、血管總面積。計算管壁厚度占外徑百分比(vascularwallthinkness／vasculardiameter,WT／D)、管壁面積占血管總面積百分比(vasculararea／totalvasculararea，WA％)。應用免疫組織化學法(IHC)法檢測ETA受體(ETAR)、ETB受體(ETBR)及內皮型一氧化氮

7、合酶(eNOS)在肺血管上皮及平滑肌上的表達。 結果 1．S組血漿ET-1含量(49．95+5．05pg／m1)顯著高于C組(22．94±5．15pg/ml)(P<0．01)，血漿NO代謝產物測值(29．56±5．61~tmol／L)高于C組(21．83~5．54gmol／L)(P=0．03)。 2．肺組織切片HE染色可見S組肺中小動脈出現(xiàn)明顯的內膜增生，肌層增厚，血管平滑肌細胞排列紊亂等肺動脈高壓病理改變，其病

8、理分級(3．40)明顯高于C組(0．87)，差異有顯著性(P<0．01)。WT／D及WA％兩個表示肺血管肌化程度的指標S組(WT／D10．21±0．83％，WA％22．34±2．51％)均顯著高于C組(WT／D5．33±0．47％，WA％14．01±1．03％)(P<0．01)。 3．免疫組織化學顯示，S組TA受體(ETAR)、ETB受體(ETBR)及內皮型一氧化氮合酶(eNOS)在肺血管的表達(ETAR84．68±8．46，E

9、TBR84．54±7．71，eNOS44．87±9．1)均強于C組(ETAR33．51±4．03，ETBR32．71±2．94，eNOS32．01±4．11)差異有顯著性(P<0．01)。 結論 1．高動力性肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展過程中，NO／TE體系均呈現(xiàn)上調。 2．ET體系的上調是血流動力學改變后肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展最重要的起始因素，ETAR、ETBR均對肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展過程起到了促進作用。 3．內源性

10、NO體系的上調繼發(fā)于ET體系的改變，但仍不能維持NO／ET之間的平衡關系． 第三部分：霧化吸入硝酸甘油對高動力性肺gJ脈高壓的預防和治療作用及其機制 研究目的 觀察NTG霧化吸入是否能降低肺動脈高壓，起到預防或緩解肺血管重構，為臨床應用奠定基礎。 材料與方法 健康雄性SD大鼠40只，隨機分成四組，每組lO只。其中三組實施腹主動脈一下腔靜脈造瘺術造成左向右的血液分流者分別包括：分流組(S組)，分流a

11、組(Sa組)，分流b組(Sb組)；而對照組(C組)僅打開腹腔暴露腹主動脈及下腔靜脈而不實行分流手術。 Sa組術后第2天開始給予硝酸甘油霧化吸入，每日1次，每次20分鐘，共8周，然后生理鹽水霧化吸入4周，每日1次，每次20分鐘。 Sb組術后第2天給予生理鹽水霧化吸入，每日1次，每次20分鐘；8周后給予硝酸甘油霧化吸入，一日2次，每次20分鐘，共4周。 S組術后第2天給予生理鹽水霧化吸入，每日1次，每次20分鐘，共1

12、2周。 C組為正常對照，術后第2天給予生理鹽水霧化吸入，每日1次，每次20分鐘。 結果 1．造模12周后超聲心動圖顯示，Sa組大鼠及Sb組大鼠三尖瓣返流及肺動脈瓣返流的發(fā)生率均明顯低于S組(P<0．01)，同C組無統(tǒng)計學意義(P>0．05)。Sa組的PV及RPEP／AT比值分別為0．77~0．08rn／s和0．60~0．06；Sb組的PV及RPEP／AT比值分別為0．80~0．08m／s和0．67±0．0

13、6，均顯著低于S組的PV及RPEP／AT比值(0．834-0．08m／s及0．80+0．03)(P<0．05)。 2．Sa組和Sb組RVSP分別為23．56~2．83mmHg和21．70~2．94mmHg，顯著低于S組(28．63~2．91mmHg)(P<0．01)。Sa組RV／(V+S)比值(0．221~0．014)顯著低于S組(0．273~0．023)(P<0．01)。Sb組平均值(0．250~0．018)低于S組，但差異無

14、統(tǒng)計學意義。Sa組、Sb組、S組之間頸動脈平均壓(MAP)無統(tǒng)計學差異(P>0．05)。 3．Sa組的血漿ET-1含量及NO代謝產物測值分別為38．16±9．98pg/ml和23．00~6．841xmol／L：Sb組的血漿ET-1含量及NO代謝產物測值分別為22．66+5．81pg/ml和16．08~2．33gmol／L，均低于S組的血漿ET-1含量及NO代謝產物測值(分別為49．95~5．05pg／ml和29．56~5．61g

15、mol／L)(P<0．01)。MetHb含量四組之間差異無統(tǒng)計學意義。 4．肺組織切片HE染色顯示，按照評分由低到高的組依次為：C組(0．87)

16、T／D10．21±0．83％．WA％22．34±2．51。說明Sa組肌化程度明顯小于Sb組及S組(P

17、中Sa組ETBR表達低于Sb組，差異有顯著性(P<0．05)。 6．Sa組、Sb組、S組內皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表達積分分別為47．79~15．29、48．39~1．73和44．87~9．1，三組之間無統(tǒng)計學差異(P>0．05)。 結論 1．長期小劑量霧化吸入NTG可以明顯降低高分流組肺動脈壓力，而不影響體循環(huán)壓力。 2．長期小劑量霧化吸入NTG可改善高分流組肺血管重建。早期應用對肺血管的保護作用