皇家外科學院大鼠視網(wǎng)膜色素變性發(fā)病過程中周期素依賴性蛋白激酶5與細胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的:觀察周期素依賴性蛋白激酶5(Cdk5)和p25在不同病程皇家外科學院(RCS)大鼠視網(wǎng)膜色素變性(RP)模型視網(wǎng)膜中的表達及與細胞凋亡的關(guān)系,探討Cdk5/p25介導的光感受器細胞凋亡在RP的發(fā)病過程中的作用。
　　方法:取RCSRP大鼠(RCS大鼠)及正常對照RCS-rdy+大鼠17、25、35、60日齡組視網(wǎng)膜,光學顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu),測量視網(wǎng)膜外核層厚度;利用免疫組織化學染色法觀察各日齡組大鼠視網(wǎng)膜中Cdk5、p2

2、5和cleave-caspase3的表達及變化;采用Western blot法測定視網(wǎng)膜中cleave-caspase3的蛋白質(zhì)表達水平;原位末端標記(TUNEL)法檢測視網(wǎng)膜中凋亡發(fā)生的情況,并對凋亡細胞平均吸光度[A,舊稱光密度(OD)]值進行統(tǒng)計分析。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:隨著出生日齡的增加,RCS大鼠視網(wǎng)膜厚度較正常對照組RCS-rdy+相應日齡組大鼠視網(wǎng)膜厚度變薄,主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜視桿、視錐細

3、胞層和外核層明顯變薄。在RCS大鼠17、25、35日齡組,Cdk5,p25和cleave-caspase3在視網(wǎng)膜中的表達呈現(xiàn)為逐漸增強的趨勢,60日齡組表達下降;對照組RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜中表達差異無統(tǒng)計學意義。Western blot法檢測結(jié)果顯示,隨著出生日齡的增加,RCS大鼠視網(wǎng)膜cleave-caspase3的表達明顯增加,以35日齡組增加最為明顯,而RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜cleave-caspase3的表達沒有明顯

4、的變化。TUNEL標記法檢測結(jié)果顯示,各日齡組視網(wǎng)膜中凋亡細胞主要出現(xiàn)在視網(wǎng)膜外核層中,在RCS大鼠17、25、35日齡組,各組凋亡細胞呈逐漸增多的趨勢,60日齡組凋亡細胞顯著下降;RCS-rdy+各日齡組凋亡細胞沒有明顯的變化。多變量偏相關(guān)分析結(jié)果顯示,Cdk5表達與p25表達、Cdk5表達與cleave-caspase3表達、Cdk5表達與凋亡細胞表達、p25表達與cleave-caspase3表達、p25表達與凋亡細胞表達、cle

5、ave-caspase3表達與凋亡細胞表達的偏相關(guān)系數(shù)分別為0.949、0.808、0.959、0.887、0.979、0.852,p值為0.000,兩兩變量之間均顯著相關(guān)。
　　結(jié)論:17、25、35日齡RCS大鼠,隨著出生日齡的增加,其視網(wǎng)膜凋亡細胞逐漸增多,而Cdk5、p25和cleave-caspase3的表達逐漸增強。RCS大鼠視網(wǎng)膜中凋亡細胞變化趨勢與Cdk5、p25和cleave-caspase3的表達水平基本一致,