志賀菌多重耐藥的分子機(jī)制研究.pdf

1、鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文志賀菌多重耐藥的分子機(jī)制研究姓名：宋春花申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師：段廣才20070530鄭州人學(xué)2007屆博十學(xué)位論文志賀菌多重耐藥的分子機(jī)制研究尚缺乏志賀菌從敏感株轉(zhuǎn)變?yōu)槎嘀啬退幹甑南到y(tǒng)的、全面的研究和評(píng)價(jià)資料，而本課題的設(shè)計(jì)立足于整體，從全基因組、蛋白質(zhì)組的角度研究志賀菌的耐藥機(jī)制。本課題以對(duì)多種抗生素敏感的志賀菌株為研究對(duì)象，采用抗生素次抑菌濃度自身誘導(dǎo)及接合基因轉(zhuǎn)移兩種方式，分別構(gòu)建

2、多重耐藥菌株，通過(guò)抑制性消減雜交技術(shù)闡明志賀菌多重耐藥的核酸基礎(chǔ)：通過(guò)對(duì)志賀菌多重耐藥蛋白質(zhì)組學(xué)研究，從蛋白質(zhì)水平上闡明志賀菌多重耐藥相關(guān)蛋白的種類(lèi)及其作用：并綜合評(píng)價(jià)志賀菌在多重耐藥產(chǎn)生過(guò)程中獲得耐藥性的主要方式及其共存的耐藥機(jī)制，為志賀菌的分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)、研發(fā)新型抗菌藥物及指導(dǎo)臨床j下確使用抗生素提供科學(xué)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法1最低抑菌濃度的測(cè)定以頭孢噻吩(cefalotin，CF)、諾氟沙星(norfloxacin，NOR)、慶大霉素(

3、gentamycin，GM)、磺胺甲基異惡唑(cotrimoxazole，SMZ)四種抗生素為指示藥物，采用改良Kirby—Bauer法篩選臨床分離的福氏志賀菌敏感株和大腸埃希菌多重耐藥株，用瓊脂稀釋法測(cè)定抗菌藥物對(duì)志賀菌敏感株的最低抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentration，MIC)。2次抑菌濃度誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)志賀菌敏感株在112MIC的抗生素LB培養(yǎng)基中連續(xù)12代培養(yǎng)，若誘導(dǎo)后MIC二一4倍誘導(dǎo)前即為誘導(dǎo)多重耐

4、藥菌株(以下簡(jiǎn)稱(chēng)誘導(dǎo)株)。3接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)以篩選出的志賀菌敏感株為受體菌，以多重耐藥大腸埃希菌為供體菌，在約4倍MIC抗生素濃度作用下進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移構(gòu)建志賀菌基因轉(zhuǎn)移多重耐藥株(以下簡(jiǎn)稱(chēng)轉(zhuǎn)移株)。4志賀菌多重耐藥抑制性消減雜交文庫(kù)的構(gòu)建采用抑制性消減雜交(suppressionsubtractivehybridization，SSH)實(shí)驗(yàn)(1)采用細(xì)菌基因組提取試劑盒提取志賀菌敏感株、誘導(dǎo)株及轉(zhuǎn)移株的全基因組DNA，以志賀菌敏感株基因組DN