志賀菌多重耐藥的分子機制研究.pdf

1、鄭州大學博士學位論文志賀菌多重耐藥的分子機制研究姓名：宋春花申請學位級別：博士專業(yè)：流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學指導教師：段廣才20070530鄭州人學2007屆博十學位論文志賀菌多重耐藥的分子機制研究尚缺乏志賀菌從敏感株轉(zhuǎn)變?yōu)槎嘀啬退幹甑南到y(tǒng)的、全面的研究和評價資料，而本課題的設計立足于整體，從全基因組、蛋白質(zhì)組的角度研究志賀菌的耐藥機制。本課題以對多種抗生素敏感的志賀菌株為研究對象，采用抗生素次抑菌濃度自身誘導及接合基因轉(zhuǎn)移兩種方式，分別構(gòu)建

2、多重耐藥菌株，通過抑制性消減雜交技術闡明志賀菌多重耐藥的核酸基礎：通過對志賀菌多重耐藥蛋白質(zhì)組學研究，從蛋白質(zhì)水平上闡明志賀菌多重耐藥相關蛋白的種類及其作用：并綜合評價志賀菌在多重耐藥產(chǎn)生過程中獲得耐藥性的主要方式及其共存的耐藥機制，為志賀菌的分子流行病學監(jiān)測、研發(fā)新型抗菌藥物及指導臨床j下確使用抗生素提供科學依據(jù)。實驗方法1最低抑菌濃度的測定以頭孢噻吩(cefalotin，CF)、諾氟沙星(norfloxacin，NOR)、慶大霉素(

3、gentamycin，GM)、磺胺甲基異惡唑(cotrimoxazole，SMZ)四種抗生素為指示藥物，采用改良Kirby—Bauer法篩選臨床分離的福氏志賀菌敏感株和大腸埃希菌多重耐藥株，用瓊脂稀釋法測定抗菌藥物對志賀菌敏感株的最低抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentration，MIC)。2次抑菌濃度誘導實驗志賀菌敏感株在112MIC的抗生素LB培養(yǎng)基中連續(xù)12代培養(yǎng)，若誘導后MIC二一4倍誘導前即為誘導多重耐

4、藥菌株(以下簡稱誘導株)。3接合轉(zhuǎn)移實驗以篩選出的志賀菌敏感株為受體菌，以多重耐藥大腸埃希菌為供體菌，在約4倍MIC抗生素濃度作用下進行接合轉(zhuǎn)移構(gòu)建志賀菌基因轉(zhuǎn)移多重耐藥株(以下簡稱轉(zhuǎn)移株)。4志賀菌多重耐藥抑制性消減雜交文庫的構(gòu)建采用抑制性消減雜交(suppressionsubtractivehybridization，SSH)實驗(1)采用細菌基因組提取試劑盒提取志賀菌敏感株、誘導株及轉(zhuǎn)移株的全基因組DNA，以志賀菌敏感株基因組DN