新生鼠實驗性缺氧缺血性損傷腦組織MCP-1及其受體CCR2的表達(dá)與小膠質(zhì)細(xì)胞活化規(guī)律的研究.pdf

1、目的 觀察新生鼠實驗性缺氧缺血性腦損傷(HIBD)后腦組織中趨化因子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)及其受體CCR2mRNA水平及蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化，觀察小膠質(zhì)細(xì)胞在HIBD后不同時間點的活化規(guī)律，探討免疫學(xué)機(jī)制在HIBD發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法采用結(jié)扎7d齡SD大鼠右側(cè)頸總動脈并暴露于8％氧氣環(huán)境2.5小時制作HIBD模型，用TaqMan實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法，動態(tài)定量監(jiān)測腦組織中MCP-1與CCR2mRNA在H

2、IBD后不同時間點表達(dá)的變化；免疫組化和WesternBlotting方法檢測MCP-1與CCR2在HIBD后不同時間點蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化；應(yīng)用ED1單克隆抗體及免疫熒光技術(shù)對缺氧缺血性損傷時小膠質(zhì)細(xì)胞的活化規(guī)律進(jìn)行研究。 結(jié)果1、HIBD后6h右側(cè)腦組織MCP-1mRNA表達(dá)至高峰，顯著高于對照組(p＜0.05)，12h組仍明顯升高(p＜0.05)，3d降至接近對照組水平(p＞0.05)。2、在HIBD后6h～24h，MCP

3、-1染色陽性細(xì)胞在右側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)腦組織中的表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于對照組，并在12h達(dá)高峰，24h仍保持較高水平表達(dá)(p均＜0.05)。在海馬區(qū)域，HIBD后3h即有較為明顯的陽性細(xì)胞出現(xiàn)。 3、右側(cè)腦組織CCR2mRNA水平于HIBD后24h達(dá)高峰，3d仍高于對照組(p＜0.05)，7d恢復(fù)至對照組水平(p＞0.05)。4、HIBD12h后CCR2蛋白表達(dá)量較對照組升高，24h達(dá)高峰，24h～3d保持較高水平表達(dá)(p＜0.05

4、)。 5、HIBD后12h右側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)腦組織中激活的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量開始增多，24小時至3d保持高水平表達(dá)(p＜0.05)，3d后開始下降；在海馬區(qū)域，HIBD后12h即有較明顯的小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤。在局灶性壞死區(qū)內(nèi)活化小膠質(zhì)細(xì)胞密集分布。 結(jié)論1、新生鼠HIBD時，MCP-1及其受體CCR2的mRNA及蛋白質(zhì)水平表達(dá)顯著增高，對照組動物無明顯變化。提示MCP-1和CCR2可能參與了缺氧缺血性腦損傷的發(fā)生機(jī)制。