人睪丸特異表達基因家族VCX-Y編碼蛋白功能的初步研究.pdf_第1頁
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1、在該研究中,我們選擇了VCX/Y家族中的VCY和VCX-8r作為研究對象,將VCY cDNA克隆到pGEX-4T3載體,在大腸桿菌中進行了GST-VCY融合蛋白的表達與純化.以純化的GST-VCY蛋白免疫新西蘭大白兔,最后獲得了抗GST-VCY蛋白的多克隆抗體.利用該抗體進行的免疫組織化研究顯示,VCY表達蛋白定位于人睪丸生精上皮組織中的精原、精母及圓形精子細胞的細胞核部位,并在某些核內(nèi)有著類似核仁的強染色點富集;而在已經(jīng)變形的精子細胞

2、中則未觀察到陽性信號.將VCY和VCY-8r cDNA都克隆到pEGFP-N1載體,構建成功綠色熒光融全表達質(zhì)粒pEGFP-N1-VCY和pEGFP-N1-VCY-8r,將兩種質(zhì)粒載體分別轉染COS7細胞后,借助碘化丙啶染色的化學熒光技術和共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),VCY和VCX-8r都被定位在COS7細胞的細胞核,并且在核仁明顯的細胞內(nèi)出現(xiàn)熒光信號在核仁部位的富集;將VCX-8r克隆到紅色熒光載體pDsRed-N1,并將其與pEGFP-N

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