低分子肝素對(duì)口腔黏膜成纖維細(xì)胞釋放IL-8的影響.pdf

1、目的：(1)體外培養(yǎng)正常人頰粘膜成纖維細(xì)胞(HBMPs)，建立口腔粘膜固有層模型，為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；(2)三種濃度低分子肝素(LMWH)、脂多糖(LPS)、HBMPs共同孵育，四個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察正常人頰粘膜成纖維細(xì)胞分泌IL-8的變化，探索低分子肝素對(duì)抗粘膜固有層炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 (1)原代培養(yǎng)人頰粘膜成纖維細(xì)胞，經(jīng)傳代培養(yǎng)，分離純化，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)法鑒定，建立穩(wěn)定的體外細(xì)胞模型。

2、
　　 (2)將分離純化后形態(tài)良好，生長(zhǎng)穩(wěn)定的第四代人頰粘膜成纖維細(xì)胞，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、炎癥對(duì)照組、藥物干預(yù)組。對(duì)照組中加入無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基，炎癥組中加入含IOμg/mlLPS的無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基，藥物組是在炎癥組的基礎(chǔ)上分別加入含0.2U/ml、1U/ml、5U/ml低分子肝素，各組接種于96孔板，分別孵育3h、6h、12h、24h后，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-8的含量變化，利用多因素方差分析對(duì)檢測(cè)結(jié)

3、果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 (1)原代培養(yǎng)的人頰粘膜成纖維細(xì)胞，經(jīng)傳代培養(yǎng)，分離純化，第四代細(xì)胞形態(tài)良好，活力旺盛。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)為長(zhǎng)梭形，細(xì)胞交織成網(wǎng)狀或束狀。免疫組織化學(xué)法顯示所得細(xì)胞抗波形蛋白染色呈陽(yáng)性，抗角蛋白染色陰性。
　　 (2)酶聯(lián)免疫吸附法結(jié)果顯示
　　 正常對(duì)照組IL-8有一定的表達(dá)量，各時(shí)間點(diǎn)差異均無(wú)顯著意義(P＞0.05)。炎癥對(duì)照組與低濃度藥物組IL-8的釋放

4、在各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。低濃度藥物組與炎癥對(duì)照組相比，12h、24h差異有顯著意義(P＜0.05)。中濃度藥物組IL-8分泌量在6h、12h、24h較炎癥組顯著降低(P＜0.05)。高濃度藥物組與正常對(duì)照組相比,3h、6h、12h有顯著差異(P＜0.05)，與炎癥對(duì)照組相比，各時(shí)間點(diǎn)差異均有顯著意義。藥物干預(yù)組各組及各時(shí)間點(diǎn)與炎癥對(duì)照組相比，IL-8分泌量均減少，呈劑量一時(shí)間依賴關(guān)系。
　　 結(jié)論：(1)