炎癥介質(zhì)白三烯D4在慢性乙型肝炎和原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、本研究分為兩部分。
　　 第一部分：慢性乙型肝炎和原發(fā)性肝癌患者血清中LTD4水平及其臨床意義。
　　 目的：研究Leukotriene D4(LTD4)在慢性乙型肝炎(CHB)和原發(fā)性肝癌(HCC)患者血清中的表達(dá)水平，并分析其與血清ALT、AST、γ-GT、HBV-DNA和AFP間的相關(guān)性，進(jìn)而探討LTD4在CHB和HCC發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 方法：選取CHB患者21例(男16例，女5例，平均年齡37.6

2、±12.7歲)，其中慢性肝炎14例、慢性重型肝炎7例；HCC患者71例(男64例，女7例，平均年齡48.9±11.1歲)，其中合并HBV者62例；及健康體檢者(對(duì)照組)20例為研究對(duì)象。應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)血清中LTD4水平，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)ALT、AST、γ-GT水平，化學(xué)發(fā)光儀和基因擴(kuò)增儀分別檢測(cè)AFP和HBV-DNA。
　　 結(jié)果：CHB和HCC患者血清LTD4水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，且其水平在C

3、HB組、HCC合并HBV組、單獨(dú)HCC組及對(duì)照組中逐漸下降。在CHB中，慢性肝炎與重型肝炎比較，LTD4水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；且LTD4水平與ALT、AST、γ-GT及HBV-DNA含量間無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。在HCC中，合并HBV組與單獨(dú)HCC組相比，LTD4水平有顯著性差異(P<0.01)；分別比較轉(zhuǎn)移組與無(wú)轉(zhuǎn)移組、治療組與未治療組，結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；LTD4水平僅與ALT呈正相關(guān)(P<0.

4、05)，而與AST、γ-GT、AFP無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。
　　 結(jié)論：LTD4作為重要的炎癥介質(zhì)，可能參與了CHB的發(fā)生發(fā)展，并在促進(jìn)CHB向HCC進(jìn)展的過(guò)程中起著一定的作用，而且對(duì)肝癌細(xì)胞自身的腫瘤生物學(xué)產(chǎn)生影響。
　　 第二部分：LTD4對(duì)人肝癌細(xì)胞細(xì)胞增殖、周期、凋亡及遷移的影響。
　　 目的：研究LTD4對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖、周期、凋亡及遷移的影響，探討其在HCC發(fā)生發(fā)展機(jī)制方面的作用。
　　

5、方法：培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不同濃度LTD4處理細(xì)胞24h、48h、72h后，采用CCK-8法測(cè)定SMMC-7721細(xì)胞的增殖活性及LTD4拮抗劑對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化；Annexin V/PI雙標(biāo)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化；8 μm Transwell法檢測(cè)肝癌細(xì)胞的遷移作用。
　　 結(jié)果：在1nmol/L處LTD4作用48h時(shí)促進(jìn)SMMC-7721細(xì)胞的增殖作用最強(qiáng)(P＜0.01)

6、，可達(dá)59％；抑制劑MK571濃度在10-8-10-6mol/L時(shí)可部分拮抗LTD4，而在10-5mol/L處能明顯抑制細(xì)胞生長(zhǎng)(P＜0.05)；LTD4在有效濃度內(nèi)作用SMMC-7721細(xì)胞后，M1/M2期細(xì)胞的比例明顯下降(P＜0.05)，促進(jìn)細(xì)胞周期從M1期向M2期分化，呈劑量依賴性；其次，它可明顯抑制細(xì)胞凋亡(P<0.05)，以早期凋亡為主，呈劑量依賴性；此外，LTD4還誘導(dǎo)癌細(xì)胞的遷移(P<0.05)，其促進(jìn)作用亦呈劑量依賴性