臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞抑制異種移植物抗宿主病的機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法：建立貼塊法分離培養(yǎng)臍帶MSC的方法，對細(xì)胞的一般形態(tài)、免疫表型和分化能力進(jìn)行鑒定；建立NOD/SCID小鼠的異種移植物抗宿主病(X—GVHD)模型，給予模型小鼠尾靜脈共輸注MSC，觀察輸注后小鼠的體重、血象和病理改變確定MSC抑制X—GVHD的效果，并在此基礎(chǔ)上對MSC抑制X—GVHD的機(jī)制作進(jìn)一步探討。 結(jié)果：①成功采用貼塊法分離培養(yǎng)的臍帶MSC。從臍帶組織周

2、圍爬出的短梭形的細(xì)胞是一群非內(nèi)皮(CD31)，非造血(CD45和CD34)，僅表達(dá)一些細(xì)胞黏附分子(CD105，CD44，CD29，CD73)的干細(xì)胞群體。它表達(dá)HLA—ABC和PD—L1，不表達(dá)CD80、CD86和HLA—DR，經(jīng)誘導(dǎo)能向脂肪和成骨細(xì)胞分化。②應(yīng)用臍血單個核細(xì)胞尾靜脈輸注建立NOD/SCID小鼠的X—GVHD模型，發(fā)現(xiàn)MSC共輸注明顯減輕X—GVHD癥狀(體重減輕、弓背、腹瀉等)，改善靶器官(肝臟、腎臟、脾臟和肺臟)的

3、病理損傷。MSC輸注雖然降低了骨髓、脾臟和周血中人源細(xì)胞的植入(p<0.05)，但明顯抑制了骨髓、脾臟和周血中人T細(xì)胞的增殖(p<0.05)，提高了CD4+/CD8+T細(xì)胞比值。③樹突狀細(xì)胞和T細(xì)胞是GVHD的效應(yīng)細(xì)胞。MSC下調(diào)單核細(xì)胞誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞成熟標(biāo)志CD83，CD86，HLA—DR的表達(dá)，減少IL-12p70的分泌，抑制樹突狀細(xì)胞對T細(xì)胞的特異性細(xì)胞毒活性(p<0.05)。在特異性抗原刺激下，臍帶MSC影響T細(xì)胞的細(xì)胞周期；

4、上調(diào)活化Th細(xì)胞的比例，下調(diào)活化Tc細(xì)胞的比例，上調(diào)活化Th/Tc比值；抑制T細(xì)胞及其亞群Th和Tc細(xì)胞的增殖；上調(diào)T細(xì)胞FoxP3基因的表達(dá)；促進(jìn)細(xì)胞因子TGF-β1和IL—6的分泌，抑制細(xì)胞因子IL-10的分泌(p<0.05)。細(xì)胞接觸在臍帶MSC與T細(xì)胞的相互作用不起主要作用。 結(jié)論：貼塊法獲得的臍帶MSC具有免疫調(diào)節(jié)作用，能抑制X—GVHD，可能是通過抑制樹突狀細(xì)胞的成熟，抑制T細(xì)胞及亞群的增殖，上調(diào)Th細(xì)胞的活化，下調(diào)