高濃度胰島素對急性冠脈綜合征患者樹突狀細(xì)胞分化、成熟及免疫功能的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察高濃度胰島素對正常人和急性冠脈綜合癥患者樹突狀細(xì)胞分化、成熟及免疫功能的影響,探討高濃度胰島素對人單核細(xì)胞源的樹突狀細(xì)胞、分化、成熟及其免疫功能的影響,進一步探索高濃度胰島素在動脈粥樣硬化免疫炎癥反應(yīng)中的作用及其(對)在急性冠脈綜合癥發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 方法:
　　 1.采用連續(xù)貼壁法分離正常人外周血單核細(xì)胞,在含重組人粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF,50ng/ml)和白細(xì)胞介素(

2、IL-4,50ng/ml)的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)5天后收集細(xì)胞,作為未成熟DC(imDC),重新鋪板后繼續(xù)在胰島素濃度分別為Onmol/1、10nmol/1的胰島素、100nmol/1的胰島素的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時后,分別收集細(xì)胞和上清液,此時細(xì)胞作為成熟Dc(mDC),采用流式細(xì)胞術(shù)檢測mDC表面CD80、CD83、CD40的表達;用ELISA法檢測上清液中細(xì)胞因子工IL-12、IL-10、TNF-α的濃度;用倒置顯微鏡動念觀察

3、DC形態(tài)變化。
　　 2.采用連續(xù)貼壁法分離急性冠脈綜合癥患者外周血單核細(xì)胞,在含重組人粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF,50ng/ml)和重組人白細(xì)胞介素(IL-4,50ng/ml)的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)5天后收集細(xì)胞,作為未成熟DC(imDC),重新鋪板后繼續(xù)在胰島素濃度分別為Onmol/l、100nmol/1的胰島素的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時后,收集細(xì)胞和上清液,此時細(xì)胞作為成熟DC(mDC),采用流式細(xì)胞術(shù)檢測m

4、DC表面CD80、CD83、CD40的表達;用ELISA法檢測上清液中細(xì)胞因子IL-12、IL-10、TNF-α的濃度:用倒置顯微鏡動態(tài)觀察DC形態(tài)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.健康對照組:胰島素濃度分別為10nmol/1和lOOnmol/ml組的DC表面標(biāo)志CD80(59.65％、84.29％)、CD83(72.51％、90.73％)、和CD40(63.87％、92.38％)的陽性表達率較不含胰島素的陰性對照組的CD

5、SO(42.57％)、CD83(58.03％)、和CD40(55.02％)陽性表達率升高,并隨著胰島素濃度的升高而升高;培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-12(25.62±7.92pg/ml、41.52±11.34 pg/ml)、TNF-α(28.44±8.56 pg/ml、41.56±10.34 pg/ml)的濃度也較陰性對照組的IL-12(10.23±5.26 pg/ml)、TNF-α(15.46±7.35 pg/ml)升高;而細(xì)胞因子IL

6、-10的濃度(9.89±7.23 pg/ml、7.36±5.78 pg/ml)則較陰性對照組(12.85±3.62 pg/m;)降低。
　　 2.急性冠脈綜合癥組:胰島素濃度為lOOnmol/ml組的DC表面標(biāo)志CDSO、CD83和CD40陽性表達率(88.18％、89.92％、93.74％)較不含胰島素的陰性對照組(67.83％、71.08％、71.03％)升高,培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-12、TNF-α的濃度(42.24±1

7、0.36 pg/ml、40.56±8.96 pg/ml)也較對照組(16.59±7.86pg/ml、18.92±7.84 pg/ml)升高,而細(xì)胞因子IL-10的濃度(7.89±6.78 pg/ml)則較對照組(10.93±5.34 pg/ml)降低了。
　　 結(jié)論:
　　 1.高濃度胰島素促進了正常人和急性冠脈綜合癥患者的DC表面標(biāo)志物CD40、CD80和CD83的表達;促進了DC對細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的分泌