紅松對PC12細胞氧化損傷抑制物分離鑒定及AD小鼠生理功能研究.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）是一種不可逆的神經(jīng)退行性腦部疾病，具有記憶能力丟失和認知功能障礙等特點。AD發(fā)病機理復雜，但與氧化應激存在密切的聯(lián)系。研究表明從天然產(chǎn)物中分離得到的植物化學物具有改善腦部氧化應激的作用，從而緩解阿爾茨海默病。本課題采用系統(tǒng)的分離提取技術(shù)，得到五種極性不同的組分，通過建立體外H2O2誘導的PC12細胞（大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤）氧化損傷模型，篩選出具有抑制氧化損傷的正丁醇萃取物（PK

2、BE）；PKBE用AB-8大孔樹脂進一步分離，篩選出對氧化損傷抑制效果更佳的PKBE50％乙醇洗脫組分（PKBE-50）；研究了PKBE-50對PC12細胞氧化損傷抑制途徑，通過阿爾茨海默病動物模型，驗證了PKBE-50的生理功能。主要研究內(nèi)容包括：
　　采用95%乙醇冷浸提取紅松球果，殘渣用水蒸氣回流提取，濃縮后的乙醇浸膏用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇進行逐級萃取，對萃取物進行成分分析。結(jié)果表明正丁醇萃取物（PKBE）中多酚和

3、黃酮含量較高，而水提物（PKWE）中多糖含量最高。
　　通過H2O2誘導的PC12細胞氧化損傷模型，發(fā)現(xiàn)PKBE對氧化損傷抑制作用最強。利用AB-8大孔樹脂對PKBE進行分離，用不同梯度乙醇洗脫，對洗脫物進行活性跟蹤。結(jié)果表明PKBE-50能明顯提高H2O2損傷后細胞的存活率、降低乳酸脫氫酶（LDH）滲漏，抑制脂質(zhì)過氧化物的生成，提高H2O2損傷后細胞內(nèi)SOD的活性；PKBE-50還能通過清除細胞內(nèi)的活性氧，抑制PC12細胞氧化損

4、傷后線粒體膜電位的下降，達到抑制PC12細胞氧化損傷的作用。
　　采用高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對PKBE-50的組成進行分析，結(jié)果表明PKBE-50含有咖啡酸、穗花杉雙黃酮、二氫楊梅素乙酰葡萄糖苷、錦葵花素3-O-葡萄糖苷等黃酮多酚類物質(zhì)等組成。
　　通過腹腔連續(xù)注射D-半乳糖和亞硝酸鈉建立氧化應激AD模型，研究了PKBE-50對小鼠學習和記憶以及小鼠腦組織中抗氧化酶系的影響。發(fā)現(xiàn)AD模型小鼠灌胃給予PKBE-50，能夠明顯改