轉(zhuǎn)錄組篩選調(diào)控脂肪儲(chǔ)存基因.pdf

1、飲食可以影響秀麗隱桿線蟲(chóng)的生活，如生長(zhǎng)發(fā)育、新陳代謝、衰老以及壽命期限等。秀麗隱桿線蟲(chóng)以細(xì)菌作為食物，不同的細(xì)菌食物可以誘導(dǎo)線蟲(chóng)不同的響應(yīng)。大腸桿菌菌株OP50是標(biāo)準(zhǔn)的食物。而另一大腸桿菌菌株HT115是通常用作RNA干擾敲除或敲低特定基因?qū)嶒?yàn)的對(duì)照食物。RNA干擾實(shí)驗(yàn)通常是依賴(lài)食物中的雙鏈RNA將那些特定基因的敲除或敲低。
　　線蟲(chóng)的幼蟲(chóng)階段包括L1，L2，L3，L4。成蟲(chóng)階段包括年輕成蟲(chóng)(Young Adult，YA)，成蟲(chóng)(

2、Adult，A)和老蟲(chóng)(Old Adult，OA)。本論文通過(guò)薄層層析，氣相色譜，尼羅紅固定染色及轉(zhuǎn)錄組技術(shù)分別研究了喂養(yǎng)不同食物（大腸桿菌OP50和HT115）時(shí)不同齡期(L3，L4，YA，A)的線蟲(chóng)脂類(lèi)代謝情況。尼羅紅固定染色結(jié)果證明喂養(yǎng)兩種不同食物時(shí)脂滴大小都是隨著線蟲(chóng)不斷生長(zhǎng)而逐漸變大。以薄層層析及氣相色譜技術(shù)分析脂肪含量及脂肪酸含量變化時(shí)，發(fā)現(xiàn)甘油三酯的含量隨著生長(zhǎng)發(fā)育有減少的趨勢(shì)及脂滴大小隨著生長(zhǎng)發(fā)育有增大的趨勢(shì)。而且C16

3、∶0、C18∶0、C18∶1n7、C20∶4n3和C20∶5n3等脂肪酸含量也發(fā)生明顯變化。
　　轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)顯示，以喂養(yǎng)OP50的L4時(shí)期的線蟲(chóng)為對(duì)照時(shí)有154個(gè)基因隨著生長(zhǎng)發(fā)育發(fā)生變化或以喂養(yǎng)HT115的L3時(shí)期的線蟲(chóng)為對(duì)照時(shí)944個(gè)基因隨著生長(zhǎng)發(fā)育發(fā)生變化。通過(guò)比較同一生長(zhǎng)時(shí)期喂養(yǎng)兩種食物的線蟲(chóng)的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)L3和L4時(shí)期有很多基因發(fā)生了變化。而在YA時(shí)期只有一個(gè)基因的表達(dá)上調(diào)，在A時(shí)期只有22個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)。故推斷秀

4、麗隱桿線蟲(chóng)多數(shù)基因表達(dá)水平的變化可能發(fā)生在生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期，而在YA和A時(shí)期基因表達(dá)水平的變化很可能導(dǎo)致衰老等。以喂養(yǎng)OP50的L4時(shí)期線蟲(chóng)為對(duì)照時(shí)，發(fā)現(xiàn)L3時(shí)期的線蟲(chóng)有2992個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)，2078個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào);YA時(shí)期的線蟲(chóng)有592個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)，582個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào);A時(shí)期的線蟲(chóng)有923個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)，976個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào)。其中有154個(gè)基因隨生長(zhǎng)發(fā)育及脂滴發(fā)育而變化，具體有96個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)和58個(gè)基

5、因表達(dá)水平上調(diào)。以喂養(yǎng)HT115的的L3時(shí)期的線蟲(chóng)為對(duì)照時(shí)，發(fā)現(xiàn)L4時(shí)期的線蟲(chóng)有2624個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)和3301個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào)，YA時(shí)期的線蟲(chóng)有805個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)和1244個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào)，A時(shí)期的線蟲(chóng)有5217個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)和4777個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào)。其中有944個(gè)基因隨秀麗隱桿線蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育及脂滴發(fā)育而變化，具體為427個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)和517個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào)。
　　我們使用RNA干擾技術(shù)觀察表達(dá)水平

6、具有差異的基因?qū)€蟲(chóng)脂類(lèi)代謝的影響。發(fā)現(xiàn)T12F5.1(sld-2)、F39H2.5、DY3.2(lmn-1)、 R07E5.15、R01 H2.3(egg-2)、C30A5.7(unc-86)、D1046.4、ZK593.7(lsm-7)、K02H11.4、T05C12.10(qua-1)和T11F9.9(col-157)共11個(gè)基因被干擾后線蟲(chóng)脂滴增大，T0882.12、F26H11.1(kbp-3)、F40F11.3和F4489.