雌激素E2和內(nèi)源性大麻素2-AG對(duì)人Th17細(xì)胞分化影響研究.pdf

1、傳統(tǒng)上，CD4+輔助性T根據(jù)其細(xì)胞因子表達(dá)分為Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞，Th1細(xì)胞以表達(dá)INF-γ為主要特征，IL-12通過(guò)誘導(dǎo)T-bet表達(dá)促進(jìn)Th1細(xì)胞分化，它在細(xì)胞免疫中發(fā)揮著重要的作用；Th2細(xì)胞以表達(dá)IL-4、IL-5和IL-13為主要特征，IL-4通過(guò)誘導(dǎo)GATA3促進(jìn)Th2細(xì)胞分化，它在體液免疫過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。Th17細(xì)胞是CD4+輔助性T細(xì)胞新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)亞群，以表達(dá)IL-17為主要特征。在小鼠模型中，TGF-β和

2、IL-6是誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化的最有效條件，人Th1 7細(xì)胞分化所需條件至今還存在較大爭(zhēng)議。Th17細(xì)胞參與機(jī)體防御胞外菌感染、抗寄生蟲免疫、介導(dǎo)慢性炎癥、器官移植免疫排斥、自身免疫疾病和腫瘤發(fā)病等多個(gè)重要生理或病理進(jìn)程。尤其是在自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制研究中，Th17細(xì)胞的作用受到廣泛關(guān)注；現(xiàn)已證明，Th17細(xì)胞參與了類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、過(guò)敏性哮喘、炎癥性腸病、紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、銀屑病等多種自身免疫性疾病的促炎癥反應(yīng)。因此，對(duì)Th17

3、細(xì)胞分化和功能的研究可以為與Th17細(xì)胞相關(guān)的疾病最終攻克提供科學(xué)依據(jù)。
　　 本論文實(shí)驗(yàn)研究的開(kāi)展主要分為三個(gè)部分：
　　 第一部分主要是建立人Th17細(xì)胞分化模型，探討了不同細(xì)胞因子對(duì)人Th17細(xì)胞分化的影響。人Th17細(xì)胞的誘導(dǎo)分化條件有多種不同的說(shuō)法，其中包括lL-1β和IL-6聯(lián)合作用、IL-1β和IL-23單獨(dú)作用或聯(lián)合作用、IL-21和TGF-β聯(lián)合作用等。本部分以人naive CD4+T細(xì)胞為材料對(duì)多種可

4、能影響人Th17細(xì)胞分化的條件進(jìn)行了探討，利用流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞IL-17的表達(dá)比例和各種與Th17細(xì)胞分化相關(guān)因子mRNA水平的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)TGF-β、IL-23、IL-1β和IL-6聯(lián)合作用誘導(dǎo)出最高比例的IL-17陽(yáng)性細(xì)胞，同時(shí)此條件對(duì)與Th17分化相關(guān)的因子的mRNA水平表達(dá)都有不同水平的促進(jìn)，最終確定TGF-β、IL-23、IL-1 β和IL-6是誘導(dǎo)人Th17細(xì)胞分化的最優(yōu)條件。該結(jié)果可為研究人Th17細(xì)胞分

5、化提供借鑒，為研究與人Th1 7細(xì)胞有關(guān)疾病提供基礎(chǔ)。
　　 第二部分主要探討雌激素E2對(duì)人Th17細(xì)胞功能的影響。多種自身免疫疾病在女性中高發(fā)，但其機(jī)制至今仍不清楚。本部分通過(guò)純化人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），以流式細(xì)胞測(cè)定法檢測(cè)其IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞率：以雌激素及其拮抗劑他莫昔芬和ICI 182.780處理PBMC后，以熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其重要因子mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明所檢測(cè)個(gè)體的PBMC中，IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞率

6、介于0.2％～1.5％。低水平E2（1nM）和高水平E2（100nM）顯著抑制IL-17A和IL-17F的合成，而中等水平E2（10nM）抑制效應(yīng)不明顯；兩個(gè)拮抗劑均未產(chǎn)生相應(yīng)的拮抗作用。E2對(duì)ERα、ERβ、RORγt、RORα和IL-23R表達(dá)的影響不明顯。E2抑制效應(yīng)的量效關(guān)系提示，雌激素水平較低或很高的個(gè)體（如男性或妊娠期女性），其Th17細(xì)胞功能可能不太活躍；反之，雌激素水平相對(duì)較高的個(gè)體（如女性），其Th17細(xì)胞功能相對(duì)活躍

7、；該結(jié)果部分解釋了多種自身免疫疾病的雌性偏向。
　　 第三部分主要探討內(nèi)源性大麻素2-AG對(duì)人Th17功能的影響。大量研究表明大麻素類物質(zhì)對(duì)Th1和Th2功能有影響，對(duì)人Th1 7功能是否有影響至今未見(jiàn)報(bào)道。本部分通過(guò)純化人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），以流式細(xì)胞測(cè)定法檢測(cè)其IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞率；2-AG及其拮抗劑AM251和AM630處理PBMC后，以熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其重要因子mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明低劑量2-AG（