慢病毒介導(dǎo)的雙自殺基因靶向治療大腸癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)的雙自殺基因靶向治療大腸癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名：陳海金申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：普外科指導(dǎo)教師：黃宗海20070601摘要系統(tǒng)的作用機(jī)理具有很強(qiáng)的互補(bǔ)性，聯(lián)合應(yīng)用此兩系統(tǒng)不僅可以提高腫瘤細(xì)胞殺傷作用，改善治療效果，而且可以擴(kuò)大腫瘤治療譜，減少耐藥現(xiàn)象發(fā)生。眾所周知，腫瘤的自殺基因治療雖已成為基因治療中研究熱點(diǎn)之一，但目的基因的靶向性及基因轉(zhuǎn)移的低效率是這～療法廣泛開(kāi)展的主要障礙實(shí)驗(yàn)研究中大多使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和

2、腺病毒載體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染治療，與其它幾種常用的病毒載體相比較，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體病毒滴度低，只能感染分裂期細(xì)胞，容納外源基因的I)NA片段長(zhǎng)度不超過(guò)8kb。而腺病毒載體感染細(xì)胞時(shí)，病毒DNA游離在細(xì)胞核內(nèi)，并不整合到染色體上，在體內(nèi)不能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的長(zhǎng)期表達(dá)，且反復(fù)應(yīng)用容易引起免疫反應(yīng)，因而在應(yīng)用上這兩種病毒載體都受到一定的限制。慢病毒載體最大的特點(diǎn)是可以感染分裂期及非分裂期細(xì)胞，容納外源性目的基因的片段大，可以在體內(nèi)長(zhǎng)期地表達(dá)，免疫反應(yīng)小，安全

3、性較好，可在更多范圍的宿主細(xì)胞內(nèi)生成高滴度的病毒，已成為當(dāng)前基因治療中載體研究的熱點(diǎn)。同時(shí)，如能使自殺基因選擇性地作用于目的腫瘤細(xì)胞而不在正常細(xì)胞中表達(dá)，將能使該治療策略更加完善。既往研究利用腫瘤特異性基因調(diào)控元件調(diào)控自殺基因表達(dá)，如以erbB2、Q一人乳白蛋白(hALA)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)自殺基因進(jìn)行乳腺癌基因治療，甲胎蛋白(AFP)基因啟動(dòng)予用于肝癌自殺基因療法，癌胚抗原(CEA)基因啟動(dòng)子用于腸道腫瘤自殺基因療法等。上述治療方案中，每一特

4、異啟動(dòng)子僅能進(jìn)行針對(duì)某一類型腫瘤細(xì)胞靶向基因治療，而絕大多數(shù)惡性實(shí)體瘤的生物學(xué)特性為生長(zhǎng)迅速，致使其滋養(yǎng)血管不能及時(shí)供應(yīng)所有腫瘤細(xì)胞，該特點(diǎn)使前體藥物難以接近所有腫瘤細(xì)胞。選擇一合適啟動(dòng)子既靶向腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞，又靶向腫痞細(xì)胞，如此既可殺傷腫瘤細(xì)胞，又可靶向破壞腫瘤滋養(yǎng)血管使得其灌流區(qū)大量腫瘤細(xì)胞缺血性壞死，這樣即高效放大了自殺基因的療效。大量研究證明，KDR在正常人體組織中里低水平表達(dá)，而在絕大多數(shù)腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，且KI)R不僅表達(dá)