LRRK2蛋白的腦組織分布和細(xì)胞定位以及LRRK2結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá).pdf

1、帕金森病是一種老年神經(jīng)退行性疾病，以運(yùn)動(dòng)徐緩、肌肉強(qiáng)直、靜止震顫以及運(yùn)動(dòng)失衡等運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)功能障礙為主要臨床癥狀。大部分帕金森病是散發(fā)性的，但是約5％-15％的病人表現(xiàn)出明顯的遺傳傾向。α-synuclein，pazrkin．PINK1．DJ—1．LRRK2。ECH-L1．ATP13A2等7個(gè)基因是已經(jīng)確定的與遺傳性帕金森病相關(guān)的基因。．LRRK2基因位于12號(hào)染色體，編碼一長(zhǎng)達(dá)2572個(gè)氨基酸的激酶。至少9個(gè)顯性遺傳性帕金森病致病性突變已

2、經(jīng)在LRRK2基因上被發(fā)現(xiàn)，其中最常見的一種致病突變G2019S，在散發(fā)性帕金森病病人中亦可發(fā)現(xiàn)。LRRK2蛋白屬于Roco蛋白家族，包含6個(gè)功能域：ANK，LRR，ROC，COR，MAPKKK和WD40，在進(jìn)化上高度保守。該蛋白的生理功能以及其突變體在帕金森病發(fā)病中的作用目前并不清楚。 目的：了解LRRK2蛋白在小鼠神經(jīng)系統(tǒng)中的分布情況及其表達(dá)水平；了解HEK293細(xì)胞中LRRK2蛋白與線粒體的共定位情況；原核表達(dá)并純化LRR

3、K2蛋白的LRR和COR結(jié)構(gòu)域。 方法：我們通過原核表達(dá)LRRK2蛋白的抗原肽段并免疫新西蘭兔，制備了LRRK2蛋白的多克隆抗體；采用該抗體，我們通過免疫組化和免疫印跡實(shí)驗(yàn)觀察了LRRK2蛋白在小鼠腦組織中的分布情況以及表達(dá)水平；我們以免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)在HEK293細(xì)胞中研究了LRRK2蛋白與線粒體的共定位情況；我們通過GST親和純化，從大腸桿菌中獲得純化的帶GST標(biāo)簽的LRRK2蛋白LRR和COR結(jié)構(gòu)域。 結(jié)果：LRR

4、K2蛋白在小鼠腦組織內(nèi)廣泛表達(dá)，但在不同的區(qū)域或神經(jīng)核團(tuán)顯示出不同的表達(dá)差異。在大腦皮質(zhì)、海馬、尾殼核、杏仁核區(qū)域LRRK2蛋白表達(dá)量最高；在黑質(zhì)、丘腦及下丘腦部分核團(tuán)、小腦普肯野細(xì)胞層也有中等強(qiáng)度的表達(dá)量；LRRK2蛋白在HEK293細(xì)胞中內(nèi)源性表達(dá)，基本分布于細(xì)胞質(zhì)中，與線粒體有很好的共定位；我們成功純化出LRRK2蛋白LRR和COR結(jié)構(gòu)域的GST融合蛋白。 結(jié)論：我們系統(tǒng)地研究了LRRK2蛋白在小鼠腦組織中的分布情況以及表