LRRK2突變體誘導(dǎo)人多巴胺能神經(jīng)元凋亡的蛋白組學(xué)的初步研究.pdf

1、學(xué)校代碼:學(xué)號(hào):10246062101012灌大碩士學(xué)位論文LRRKZ突變體誘導(dǎo)人多巴胺能神經(jīng)元凋亡的蛋白組學(xué)的初步研究院系:__匕海醫(yī)學(xué)院專(zhuān)業(yè):神經(jīng)生物學(xué)姓名:陳潔一導(dǎo)師:陳俊教授一導(dǎo)師組:高艷琴曹?chē)?guó)棟完成日期:2009年5月復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院2009年碩士論文摘要1.中文摘要背景:帕金森病是第二大神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其發(fā)病率僅次于老年癡呆癥，在50歲人群中其發(fā)病率約為0.3%，而在85歲人群中則高達(dá)4.3%。目前對(duì)帕金森病的發(fā)病機(jī)制

2、還不完全清楚，近年來(lái)對(duì)家族性帕金森病的研究發(fā)現(xiàn)，LRRKZ(Leucine一richrepeatkinase2)基因的突變與常染色體顯性帕金森病密切相關(guān)。在散發(fā)性病人中LRRKZ的突變率約為3%，而在家族性帕金森病人中突變率卻高達(dá)13%，并且這些病人的臨床表現(xiàn)與自發(fā)性帕金森病無(wú)法區(qū)別，因此對(duì)LRRKZ突變體的毒性研究將有助于加深對(duì)帕金森病發(fā)病機(jī)制的理解。方法:我們利用脂質(zhì)體LIPofectamineZ000把GFP質(zhì)粒和LRRKZ質(zhì)粒共

3、轉(zhuǎn)染到SH一SYSY細(xì)胞中建立凋亡模型，并以綠色熒光為信號(hào)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分選，收集陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞。然后對(duì)分選得到的細(xì)胞進(jìn)行2一D蛋白電泳和MS一MS質(zhì)譜分析，找出可能出現(xiàn)差異表達(dá)的蛋白，并利用westemblot免疫印跡法對(duì)這些蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。最后，我們對(duì)表達(dá)確實(shí)發(fā)生變化的蛋白進(jìn)行了初步的功能研究。結(jié)果:本課題建立了LRRKZ突變體G20195一LRRKZ誘導(dǎo)SH一SYSY細(xì)胞株凋亡的細(xì)胞模型，并通過(guò)蛋白組學(xué)研究方法初步探討了該突變體

4、過(guò)表達(dá)后細(xì)胞蛋白表達(dá)譜的變化。與空白對(duì)照組和野生型組相比，在G20195一LRRKZ過(guò)表達(dá)的細(xì)胞中以下6種蛋白的表達(dá)發(fā)生了變化:proteindisulfideisomerase、EEFlo(euk娜otietranslationenlongationfaet1gamma)、laetatedehydrogenaseB、GSTPI(glutathiones一transferasepl)、GDIalpha(GDpdissoeiationin