Tyro3受體酪氨酸激酶亞家族在調(diào)節(jié)小鼠紅細(xì)胞發(fā)生中的功能.pdf

1、Tyro3受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases，RTKs)亞家族包括Tyro3，Axl和Mer三個(gè)成員，配體是Gas6和Protein S。它們廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物的神經(jīng)、免疫、生殖、造血和血管等組織中，并在神經(jīng)發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、精子發(fā)生、NK細(xì)胞分化、血小板功能以及血管發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用。Tyro3 RTKs亞家族這三個(gè)受體雖然在造血系統(tǒng)中均有表達(dá)，但在造血中的功能所知甚少。本文主要研究Tyro3 RTK

2、s對(duì)紅細(xì)胞發(fā)生的調(diào)節(jié)作用。 1.用RT-PCR，Western blot以及免疫細(xì)胞化學(xué)的方法，檢測(cè)Tyro3 RTKs亞家族三個(gè)成員在紅系細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞發(fā)生的各個(gè)階段都表達(dá)Axl和Mer，但不表達(dá)Tyro3。骨髓基質(zhì)細(xì)胞不僅表達(dá)這三個(gè)受體，而且還表達(dá)其配體Gas6和Protein S。提示這三個(gè)受體及其配體可能影響紅系造血。 2.對(duì)基因敲除小鼠的表型分析發(fā)現(xiàn)，Axl—/—Mer—/—(AM)

3、小鼠骨髓內(nèi)紅系細(xì)胞，特別是成熟紅細(xì)胞的數(shù)量顯著下降。但單基因敲除(Axl—/—和Mer—/—，簡(jiǎn)稱A和M)小鼠骨髓中紅系細(xì)胞的數(shù)量未見(jiàn)異常。表明Axl和Mer在紅細(xì)胞發(fā)生中起著重要的調(diào)節(jié)作用。 3.AM小鼠肝、脾體積增大，重量增加。肝臟中出現(xiàn)造血島；脾臟中紅髓增生明顯。流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)脾臟中存在大量的紅系造血細(xì)胞。說(shuō)明AM小鼠骨髓造血功能受損，導(dǎo)致髓外造血發(fā)生。 4.集落形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AM小鼠骨髓內(nèi)的紅系祖細(xì)胞明顯增多。

4、流式細(xì)胞儀分析表明，AM小鼠骨髓內(nèi)早期的紅系細(xì)胞的比例是正常小鼠的2倍，但是祖細(xì)胞以后的發(fā)育階段—早、中、晚幼紅細(xì)胞以及成熟紅細(xì)胞明顯減少。流式分析AM小鼠骨髓內(nèi)的紅系祖細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡均沒(méi)有變化。說(shuō)明AM小鼠骨髓內(nèi)紅細(xì)胞發(fā)生發(fā)育阻滯在造血祖細(xì)胞階段，且Axl和Mer對(duì)紅系祖細(xì)胞具有調(diào)控作用。 5.正常小鼠骨髓移植到致死劑量γ照射的AM小鼠體內(nèi)，骨髓造血功能正常。相反AM小鼠骨髓細(xì)胞移植到致死劑量γ照射的正常小鼠體內(nèi)，骨髓造

5、血功能異常，與AM小鼠骨髓造血一致?；旌弦浦矊?shí)驗(yàn)，將正常和AM小鼠骨髓細(xì)胞等量混合移植到致死劑量γ照射的正常小鼠體內(nèi)，骨髓造血功能正常。說(shuō)明AM小鼠骨髓內(nèi)的紅系造血異常并非由骨髓造血微環(huán)境的改變引起的，而是由紅系細(xì)胞自身分化障礙引起的。 6.為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)Axl和Mer調(diào)節(jié)紅細(xì)胞發(fā)生的分子機(jī)理，研究了它們對(duì)紅細(xì)胞發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AM小鼠中與紅系發(fā)生密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子GATA—1和調(diào)控紅細(xì)胞發(fā)育的重要細(xì)胞因子Epo受