炎癥介質(zhì)對(duì)腎小管上皮細(xì)胞中PPARγ和輔調(diào)節(jié)因子表達(dá)的影響及機(jī)制.pdf

1、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPARs）是一類配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員之一。由于PPARs參與調(diào)節(jié)多種生理功能，如脂肪細(xì)胞分化、炎癥反應(yīng)、脂肪酸及脂類代謝、細(xì)胞周期和凋亡等，因而成為近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。PPARs在腎臟組織和細(xì)胞中廣泛表達(dá)。PPARγ是PPARs的重要的表型之一，已經(jīng)證實(shí)PPARγ及其激動(dòng)劑在一些腎臟疾病，如腎小球硬化、腎小球腎炎、腎小管間質(zhì)炎癥和腎臟微血管病變中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。本研究以TNF-α和IL

2、-1b為刺激劑，以人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2細(xì)胞）為研究對(duì)象，利用Real-time PCR法、Western Blot法、EMSA法及ELISA法觀察炎癥反應(yīng)狀態(tài)下，NF-κB、PPARγ、輔調(diào)節(jié)因子以及趨化因子的表達(dá)變化特點(diǎn)，探討它們與炎癥發(fā)展過(guò)程之間存在的關(guān)系。主要內(nèi)容如下： 第一部分：研究發(fā)現(xiàn)不同濃度的TNF-α作用于HK-2細(xì)胞24小時(shí)后，MCP-1的mRNA表達(dá)水平隨著刺激濃度的遞增呈顯著上調(diào)趨勢(shì)。TNF-α（1

3、0ng/ml）刺激HK-2細(xì)胞0.5h時(shí)MCP-1的mRNA水平即出現(xiàn)顯著上調(diào)（P<0.05），4h時(shí)達(dá)到高峰（約為對(duì)照組的11倍，P<0.01），之后逐漸下降，至8h時(shí)仍然高于正常（P<0.05）。ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，TNF-α（10ng/ml）作用于HK-2細(xì)胞后，MCP-1的蛋白分泌水平持續(xù)增高，至24h達(dá)到最高值，由基礎(chǔ)水平時(shí)的15.52±1.05pg/ml升至40.5±0.97 pg/ml（P<0.05）。IL-1?

4、（10ng/ml）也可誘導(dǎo)MCP-1的分泌水平持續(xù)增高，刺激8h后即達(dá)到最高值，由基礎(chǔ)水平時(shí)的19.33±2.33pg/ml升至160.56±2.8 pg/ml（P<0.01），之后緩慢下降，至24小時(shí)仍為50.82±1.25pg/ml（P<0.05）。上述結(jié)果表明TNF-α和IL-1b具有較強(qiáng)的致炎效應(yīng)。 第二部分：研究發(fā)現(xiàn)TNF-α和IL-1?作用于HK-2細(xì)胞24h后，PPARγ mRNA表達(dá)水平隨著刺激濃度的增高均呈顯著

5、下調(diào)趨勢(shì)。在時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著TNF-α和IL-1?（10ng/ml）刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，HK-2細(xì)胞中PPARγ mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平也均呈顯著下調(diào)趨勢(shì)。利用同批核蛋白進(jìn)行EMSA檢測(cè)的結(jié)果顯示，隨著兩者刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，PPARγ的DNA結(jié)合活性呈總體減弱趨勢(shì)，至24h達(dá)到最低；NF-κB的活性均呈總體增強(qiáng)趨勢(shì)，至24h達(dá)到高峰。這些結(jié)果表明，TNF-α和IL-1介導(dǎo)的炎癥刺激均可以引起腎小管上皮細(xì)胞中的PPARγ mRNA和蛋

6、白質(zhì)表達(dá)水平下降，同時(shí)引起PPARγ的DNA結(jié)合活性下降，而NF-κB－一種在炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起發(fā)揮關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子的活性增強(qiáng)。 第三部分：的結(jié)果顯示不同濃度的TNF-α和IL-1?刺激24h后，輔激活因子SRC-1、SRC-2、SRC-3和PGC-1隨著刺激濃度的增高均呈現(xiàn)顯著下調(diào)趨勢(shì)(P<0.05)，而輔抑制因子NCoR表現(xiàn)為顯著上調(diào)(P<0.05)。選擇10 ng/ml作為最佳刺激濃度，發(fā)現(xiàn)TNF-α作用不同的時(shí)間后，SR

7、C-3和PGC-1的mRNA水平在刺激1h時(shí)出現(xiàn)顯著下調(diào)，分別降低了53％和46％(P<0.01)；SRC-1和SRC-2的mRNA水平在刺激2h后出現(xiàn)顯著下調(diào)，分別降低了35％和41％(P<0.05)； NCoR則在刺激16h后出現(xiàn)顯著上調(diào)（約為對(duì)照組的2.16倍，P<0.01）。而10 ng/ml的IL-1?作用不同的時(shí)間后發(fā)現(xiàn)SRC-2和PGC-1的mRNA水平在刺激1h后分別顯著下調(diào)了57％(P<0.01)和48％(P<0.01