靶向G-四鏈體的新型小分子對(duì)MYC啟動(dòng)子和端粒酶活性的抑制作用及其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡.pdf

1、腫瘤是威脅人類生命和健康的主要疾病，是人類的第二號(hào)殺手?；熓悄[瘤治療的三大手段之一，但目前傳統(tǒng)的化療藥物主要是細(xì)胞毒藥物，其作用機(jī)理是依賴腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞在生長(zhǎng)、修復(fù)、死亡的動(dòng)力學(xué)差異。因此這類藥不可避免地會(huì)影響正常細(xì)胞，帶來臨床上常見的各種不良反應(yīng)。另一方面耐藥性的產(chǎn)生也限制了這類藥物在臨床上的應(yīng)用。靶向腫瘤特異性新靶點(diǎn)的抗癌藥物研究，已經(jīng)成為近幾年的研究熱點(diǎn)。 最常見的DNA是單鏈或雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，但在K+、Na+等離子的

2、存在下，富含鳥嘌呤堿基重復(fù)序列的核苷酸能夠形成G-四鏈體結(jié)構(gòu)。人端粒DNA由5′-(TTAGGG)-3′重復(fù)序列和一個(gè)3’懸突端組成，這一段單鏈結(jié)構(gòu)在生理?xiàng)l件下有可能會(huì)形成G-四鏈體結(jié)構(gòu)。人們發(fā)現(xiàn)除了染色體端粒末端，一些重要的癌基因如c-myc，bcl2，c-Fos以及c-ABL等，也可以形成G-四鏈體。因?yàn)槟[瘤基因表達(dá)的端粒維持機(jī)制和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)已成為腫瘤藥物設(shè)計(jì)的重要靶點(diǎn)，所以G-四鏈體結(jié)構(gòu)有可能成為抗腫瘤藥物的新靶點(diǎn)。 白葉藤

3、堿是一種天然的生物堿，它的化合物和鹽類有許多有用的生物學(xué)功能。在其從天然產(chǎn)物中分離之前就已有關(guān)于合成的報(bào)道。這類化合物可以從中非和西非的居民用于治療瘧疾的非洲植物Cryptolepis anguilolenta中分離，也有報(bào)導(dǎo)它們可用于抗高血糖癥。本實(shí)驗(yàn)室以端粒DNA的G-四鏈體為靶點(diǎn)，利用CD光譜分析和端粒酶活性檢測(cè)的酶聯(lián)免疫(TRAP-ELISA)方法，已經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)白葉藤堿類似物可促進(jìn)富含鳥嘌呤的DNA序列發(fā)生折疊形成G-四鏈體，誘

4、導(dǎo)端粒的縮短和腫瘤細(xì)胞的衰老。 c-myc是一種重要的癌基因是細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期的必需因子。c-myc蛋白作為核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可與MAX蛋白形成穩(wěn)定的二聚體，與DNA特異序列相結(jié)合，直接激活基因的轉(zhuǎn)錄，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。并且c-myc啟動(dòng)子核酸酶超敏單元Ⅲ1(MHEⅢ1)區(qū)域，存在著容易形成G-四鏈體的結(jié)構(gòu)。因此尋找既抑制端粒功能又抑制myc啟動(dòng)子活性的靶向G-四鏈體的新型小分子，具有更好的應(yīng)用前景。

5、 許多種腫瘤細(xì)胞包括急性髓系白血病，都有端粒酶的高表達(dá)。c-myc是一種重要的癌基因，在白血病細(xì)胞和其他腫瘤細(xì)胞中也有過表達(dá)。本次研究在白葉藤堿類似物能夠穩(wěn)定端粒形成的G-四鏈體結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，利用PCR-stop實(shí)驗(yàn)從白葉藤堿中篩選出與c-myc啟動(dòng)子相互作用的G-四鏈體小分子配體，并研究其對(duì)腫瘤細(xì)胞c-myc及其調(diào)控的下游基因E2F1、hTERT的表達(dá)的影響；對(duì)端粒結(jié)合蛋白TRF1和TRF2表達(dá)的影響；對(duì)端粒酶活性的影響；對(duì)凋亡誘導(dǎo)及