BMP9通過(guò)ERK5信號(hào)通路調(diào)控根尖牙乳頭干細(xì)胞成骨-成牙本質(zhì)分化.pdf

1、目的：
　　研究BMP9是否可以通過(guò)激活ERK5信號(hào)通路調(diào)控iSCAP細(xì)胞成骨／成牙本質(zhì)分化。
　　方法：
　　首先，實(shí)驗(yàn)分為四組，空白組，GFP控制組，BMP9陽(yáng)性對(duì)照組和BMP+BIX02189實(shí)驗(yàn)組。然后采用 Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Ad-BMP9轉(zhuǎn)染iSCAP后ERK5蛋白的磷酸化水平變化及其加入ERK5抑制劑BIX02189后的變化；采用堿性磷酸酶（ALP）染色方法檢驗(yàn)早期成骨／成牙本質(zhì)標(biāo)志物的變化；

2、RT-PCR分析成骨／成牙本質(zhì)相關(guān)基因Runx2、骨鈣蛋白、骨橋蛋白和牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1的mRNA表達(dá)水平的變化。最后茜素紅染色觀察鈣鹽沉積程度來(lái)檢測(cè)晚期成骨／成牙本質(zhì)標(biāo)志物的變化。
　　結(jié)果：
　　（1）BMP9可以上調(diào)iSCAP中P-ERK5的表達(dá)水平，證實(shí)BMP9-ERK5通路存在于iSCAP細(xì)胞成骨/成牙本質(zhì)分化過(guò)程中；
　　（2）在ERK5抑制劑BIX02189作用下，iSCAP細(xì)胞中ERK5的磷酸化表達(dá)下降顯

3、著，但ERK5總蛋白表達(dá)量變化不明顯；
　?。?）ALP染色實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)加入抑制劑的實(shí)驗(yàn)組iSCAP細(xì)胞中的ALP陽(yáng)性染色比BMP9組明顯降低；
　?。?）RT-PCR檢測(cè)的成骨／成牙本質(zhì)相關(guān)基因Runx2、骨鈣蛋白、骨橋蛋白和牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1的轉(zhuǎn)錄水平顯示加入抑制劑的實(shí)驗(yàn)組其表達(dá)也受到了抑制；
　?。?）茜素紅染色同樣發(fā)現(xiàn)抑制劑組鈣鹽沉積顆粒比BMP9組顯著減少；
　　（6）通過(guò)一系列體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)從早/中/晚期成骨