腫瘤相關基因的突變檢測及功能和調控研究.pdf

1、第一部分：中國人乳腺癌相關基因BRCA1/2基因的突變檢測及LOVD數據庫構建
　　 目的：作為國際基因變異組計劃的一部分(HVP-China)，利用LOVD格式，構建一個針對中國人群的BRCA1/2基因變異新數據庫。
　　 方法：搜索PubMed以及一些中文數據庫如萬方、維普等，收集所有在中國人群中報道過的BRCA1/2基因的變異，將其以正確的格式提交到LOVD數據庫。此外，在臨床基因檢測過程中，收集家族性乳腺癌和早發(fā)

2、性乳腺癌患者的外周血樣本，提取DNA，利用PCR和測序檢測BRCA1基因的變異，并將新發(fā)現的變異提交到數據庫。
　　 結果：到目前為止，根據我們數據庫中的內容，在中國人的BRCA1和BRCA2基因上已經分別發(fā)現了136和62個不同的變異。與其他種族的人群相比，中國人有其獨特的BRCA1/2基因突變熱點和高頻突變。在這兩個基因上的14個最常見的致病突變中，有50％是BIC數據庫中未報到過的。
　　 結論：在中國人群中建立了

3、第一個BRCA1/2基因變異數據庫。BRCA1/2基因在中國人中的突變與其他種族的人群有所不同。該數據庫的建立有助于科研工作者和臨床醫(yī)生對遺傳性乳腺癌和卵巢癌以及其它由BRCA1/2基因突變引起的腫瘤的研究、檢測和診斷，尤其有利于今后中國人群的BRCA1/2基因檢測。
　　 第二部分：DTWD1基因在胃癌中的功能和調控研究
　　 目的：明確DTWD1基因在胃癌細胞中的功能，尋找其可能的調控因子以及其調控機制。
　　

4、 方法：在正常胃細胞和胃癌細胞系中、TSA處理前后的胃癌細胞中以及臨床手術收集的正常和胃癌組織中，用實時定量RT-PCR檢測DTWD1的表達水平。用不同的HDACsiRNA轉染胃癌細胞，以明確DTWD1的表達主要是受到哪一個HDAC的抑制。熒光素酶報告基因分析用于確定DTWD1基因的啟動子區(qū)域，然后用Ch1P檢測p53蛋白和DTWD1啟動子的結合情況。為了驗證DTWD1的基因的抑癌功能，細胞在轉染DTWD1表達載體或siRNA后進行M

5、TS和克隆形成試驗。Westernblot用于檢測蛋白表達水平。
　　 結果：DTWD1在胃癌中表達下調，TSA處理或轉染HDACsiRNA能上調其表達。DTWD1在胃癌中的下調主要是受到HDAC3的抑制。P53蛋白能夠與DTWD1啟動子結合并促進其表達，而HDAC3會影響兩者的結合作用。在胃癌細胞中過表達外源DTWD1能夠抑制細胞的生長和克隆形成能力，而在正常細胞中用siRNA敲除該基因后，細胞生長速度則加快。