酸性鞘磷脂酶調(diào)節(jié)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號通路在吳茱萸堿誘導的胃癌SGC-701細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：明確在吳茱萸堿誘導的胃癌SGC-7901細胞凋亡中起作用的鞘磷脂酶及其調(diào)節(jié)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號通路在此凋亡中的作用；明確吳茱萸堿誘導胃癌BGC-823細胞凋亡的作用及對caspase3、caspase8、caspase9蛋白表達的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)人胃癌 SGC-7901及 BGC-823細胞，根據(jù)不同的干預方法設置的各組分別作用于SGC-7901細胞24h及不同濃度吳茱萸堿作用BGC-823細胞24h、36h及48h后

2、：①CCK8比色法觀察對兩種細胞的細胞毒作用；②Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術檢測兩種細胞的凋亡率；PI單染檢測 BGC-823細胞的周期變化；③電鏡觀察SGC-7901細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結構變化；④Real-time PCR檢測SGC-7901中JNK、CHOP、Caspase4基因的表達情況，采用β-actin作內(nèi)參；⑤western Blotting檢測SGC-7901細胞中的JNK、p-JNK、CHOP、Caspas

3、e4及BGC-823細胞中caspase3、caspase8、caspase9的蛋白表達情況，β-actin為內(nèi)參。
　　結果：①CCK8和Annexin V-FITC/PI雙染結果顯示：吳茱萸堿可誘導SGC-7901細胞凋亡，100μM D609能阻滯此凋亡作用；30μM內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑Salubrinal亦能抑制此凋亡作用；吳茱萸堿可以誘導 BGC-823細胞凋亡（半數(shù)抑制濃度為20μM），且誘導的凋亡隨時間和劑量的增加而增強

4、；②PI單染結果顯示：吳茱萸堿影響了BGC-823細胞的周期分布，使其阻滯于G0/G1期；③電鏡結果顯示：1.5μM吳茱萸堿單獨作用SGC-7901細胞后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著擴張；與D609同時作用組，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無明顯改變；④Real-time PCR結果顯示：吳茱萸堿作用組中，SGC-7901細胞內(nèi)的JNK、CHOP、Caspase4基因表達上調(diào)；與D609同時作用后，JNK、CHOP、caspase4基因表達下調(diào)，差異顯著（P?0.05）；⑤W

5、estern blotting結果顯示：吳茱萸堿可使胃癌 SGC-7901細胞內(nèi)的p-JNK、CHOP、caspase4蛋白表達增高；加入D609后，p-JNK、CHOP、caspase4表達減低，差異顯著（P?0.05）；單純D609組與對照組相比，p-JNK、CHOP、caspase4的表達無差異；吳茱萸堿作用BGC-823細胞24h、36h后caspase3、caspase8、caspase9的表達上調(diào)，作用48h后，caspas

6、e3、caspase8、caspase9的表達下調(diào)。
　　結論：1.酸性鞘磷脂酶與吳茱萸堿誘導的胃癌SGC-7901細胞凋亡有關;
　　2.酸性鞘磷脂酶可進一步活化下游的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號通路，使p-JNK、CHOP、caspase4蛋白表達上調(diào)而誘導SGC-7901細胞凋亡;
　　3.吳茱萸堿可使胃癌BGC-823細胞的周期阻滯于G0/G1期，并在一定時間內(nèi)使caspase3、caspase8、caspase9蛋白表達上