α-螺旋抗癌肽L-K6對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的內(nèi)化機(jī)制研究.pdf

1、L-K6是中國林蛙皮膚抗菌肽Temporin-1 CEb的改造肽。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，L-K6對多種乳腺癌細(xì)胞的增殖有顯著的抑制作用。跨膜電位檢測顯示L-K6對乳腺癌MCF-7的細(xì)胞膜無明顯的去極化作用，對細(xì)胞膜通透性影響較小并且對細(xì)胞膜沒有明顯的破壞作用。這些結(jié)果提示L-K6對乳腺癌MCF-7細(xì)胞的作用靶點(diǎn)可能是胞內(nèi)物質(zhì)而非細(xì)胞膜。本論文初步探究L-K6進(jìn)入細(xì)胞膜方式及作用機(jī)制。
　　首先，我們利用激光共聚焦顯微鏡和超高分辨率

2、顯微鏡研究L-K6對乳腺癌MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞骨架、細(xì)胞核形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果顯示L-K6作用1小時(shí)，MCF-7細(xì)胞膜基本保持完整，細(xì)胞骨架形態(tài)清晰，但是細(xì)胞核熒光減弱，并隨L-K6濃度增大核熒光減弱程度增加。說明L-K6以某種方式進(jìn)入細(xì)胞后，作用于細(xì)胞核。其次，我們利用流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、超高分辨率顯微鏡研究L-K6的入膜方式。檢測結(jié)果顯示，用內(nèi)吞抑制劑甲基-β-環(huán)糊精(M-β-CD)、阿米洛利(EIPA)、氯丙嗪(CPZ

3、)、細(xì)胞松弛素D(CyD)處理細(xì)胞后，F(xiàn)ITC-L-K6的內(nèi)化量均有不同程度的減少，證明L-K6主要以內(nèi)吞的方式進(jìn)入MCF-7細(xì)胞，其中細(xì)胞松弛素D(CyD)對L-K6內(nèi)化量的影響最為顯著。為探究L-K6內(nèi)化過程的能量依賴性，我們進(jìn)行了低溫試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在4℃低溫環(huán)境中L-K6的內(nèi)化量與37℃環(huán)境中L-K6的內(nèi)化量相比顯著降低，說明L-K6的內(nèi)化具有能量依賴性。
　　L-K6是陽離子抗菌肽，其首先通過靜電作用與MCF-7細(xì)胞