共表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白和豬瘟病毒E2蛋白的“自殺性”DNA疫苗在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）的GP5蛋白是PRRSV最重要的結(jié)構(gòu)蛋白之一，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體并具有很強(qiáng)的中和病毒活性，而且還可刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫，是研制新型疫苗的首選靶蛋白。
　　豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）E2囊膜糖蛋白是CSFV的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中

2、和抗體和保護(hù)性免疫應(yīng)答，因此，E2蛋白是開發(fā)豬瘟新型疫苗、診斷試劑及研究CSFV致病機(jī)理的重要靶蛋白。
　　“自殺性”DNA疫苗（suicidal DNA vaccine）是基于常規(guī)DNA疫苗和“自主復(fù)制型”RNA疫苗（self-replicating RNA vaccine）基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型疫苗，不僅具有“自主復(fù)制型”RNA疫苗的安全性與高效性，而且結(jié)合了常規(guī)DNA疫苗制備簡(jiǎn)單、保存方便等優(yōu)點(diǎn)，這使其成為目前核酸疫苗研究

3、的熱點(diǎn)。
　　為了獲得新型雙價(jià)“自殺性”DNA疫苗，將PRRSV GP5基因克隆于此前構(gòu)建的表達(dá)CSFV E2基因的甲病毒復(fù)制子載體疫苗pSFV1CS-E2中。為了增強(qiáng)免疫效果，在密碼子優(yōu)化的GP5基因中插入了泛DR表位（PADRE），在CSFV E2基因后融合偽狂犬病病毒（PrV）UL49基因，獲得了6種重組質(zhì)粒。間接免疫熒光試驗(yàn)顯示，PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞中得到同時(shí)表達(dá)。將6種重組質(zhì)粒和

4、空載體pSFV1CS分別免疫BALB/c小鼠，用間接ELISA方法檢測(cè)血清抗體水平，通過基于CSFE/WST-8的淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)和細(xì)胞因子ELISA評(píng)價(jià)疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫。結(jié)果顯示，除pSFV1CS組外，從各疫苗組小鼠血清中均可檢測(cè)到低水平的針對(duì)GP5和E2蛋白的抗體；各疫苗組小鼠脾細(xì)胞經(jīng)CSFV和PRRSV刺激后均能發(fā)生特異性的淋巴細(xì)胞增殖；部分疫苗組小鼠脾細(xì)胞經(jīng)CSFV和PRRSV刺激后可分泌較高水平的IFN-γ和IL-4；引入U(xiǎn)