左乙拉西坦對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性功能的影響.pdf

1、目的:以往的臨床研究顯示，接受左乙拉西坦(LEV)治療的患者常常伴有較高的感染發(fā)病率（主要是感冒），但機(jī)制不明。在我們的前期臨床試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)接受左乙拉西坦治療的患者外周靜脈血中CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)有下降的趨勢(shì)。本研究的重點(diǎn)是調(diào)查左乙拉西坦在體外對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性功能的影響，同時(shí)與丙戊酸鈉進(jìn)行比對(duì)(VPA)。
　　方法:分離外周血單核細(xì)胞，在不同藥物濃度下觀察左乙拉西坦和丙戊酸鈉對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡和病毒多肽(

2、CEF)誘發(fā)的細(xì)胞毒性功能的影響。采用的藥物濃度分別是:左乙拉西坦5或50 mg/L，丙戊酸鈉10或100 mg/L。外周血單核細(xì)胞分別在以上藥物濃度下體外培養(yǎng)1h和24h，采用流式細(xì)胞儀對(duì)比觀察凋亡率，CD8+T淋巴細(xì)胞的凋亡定義為CD3+/CD8+/Annexin+/PI-。在細(xì)胞毒性功能的研究中，病毒多肽誘導(dǎo)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞的激活后，在不同藥物濃度下，采用流式細(xì)胞儀對(duì)比觀察穿孔素釋放、CD107+表達(dá)率和CFSE稀釋法顯示

3、的細(xì)胞增生。CD8+T淋巴細(xì)胞的脫顆粒效應(yīng)通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的穿孔素減少和細(xì)胞表面的CD107+增加來(lái)表示。采用流式細(xì)胞儀分析和Westernblot分析檢測(cè)SV2A在人CD8+T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。
　　結(jié)果:在病毒多肽刺激后2h，高濃度(50 mg/L)和低濃度(50mg/L)的左乙拉西坦均顯著抑制了CD8+T淋巴細(xì)胞的穿孔素釋放(LEV50 mg/L vs CEF:25.8±12.9％ vs18.2±9.7％, p＜0.01; LEV

4、5mg/L vs CEF:24.1±13.7％ vs18.2±9.7％，p＜0.01;n=15)和CD107+表達(dá)率的增加(LEV50mg/L vs CEF:5.3±2.5％ vs11.5±4.7％, p＜0.01; LEV5mg/L vs CEF:6.7±2.2％ vs11.5±4.7％，p＜0.01;n=15)，但在病毒多肽刺激后5h，僅有高濃度(50 mg/L)的左乙拉西坦保持了針對(duì)CD107+表達(dá)率增加的抑制效應(yīng)(LEV50mg

5、/L vs CEF:13.97±4.71％ vs18.43±6.68％，p＜0.05;n=15)。左乙拉西坦對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞的凋亡和病毒多肽誘導(dǎo)的增生無(wú)明顯影響(p＞0.05)。高濃度的丙戊酸鈉(100mg/L)顯著抑制了CD8+T淋巴細(xì)胞在體外的自發(fā)性凋亡(VPA100mg/L vs對(duì)照組:7.8±3.4％ vs11.5±4.2％，p＜0.01，n=15)，但丙戊酸鈉組未顯示其他具有統(tǒng)計(jì)意義的效應(yīng)差異(p＞0.05)。人CD8+T