左乙拉西坦對CD8+T淋巴細胞凋亡和細胞毒性功能的影響.pdf

1、目的:以往的臨床研究顯示，接受左乙拉西坦(LEV)治療的患者常常伴有較高的感染發(fā)病率（主要是感冒），但機制不明。在我們的前期臨床試驗中，發(fā)現(xiàn)接受左乙拉西坦治療的患者外周靜脈血中CD8+T淋巴細胞計數(shù)有下降的趨勢。本研究的重點是調查左乙拉西坦在體外對CD8+T淋巴細胞凋亡和細胞毒性功能的影響，同時與丙戊酸鈉進行比對(VPA)。
　　方法:分離外周血單核細胞，在不同藥物濃度下觀察左乙拉西坦和丙戊酸鈉對CD8+T淋巴細胞凋亡和病毒多肽(

2、CEF)誘發(fā)的細胞毒性功能的影響。采用的藥物濃度分別是:左乙拉西坦5或50 mg/L，丙戊酸鈉10或100 mg/L。外周血單核細胞分別在以上藥物濃度下體外培養(yǎng)1h和24h，采用流式細胞儀對比觀察凋亡率，CD8+T淋巴細胞的凋亡定義為CD3+/CD8+/Annexin+/PI-。在細胞毒性功能的研究中，病毒多肽誘導特異性CD8+T淋巴細胞的激活后，在不同藥物濃度下，采用流式細胞儀對比觀察穿孔素釋放、CD107+表達率和CFSE稀釋法顯示

3、的細胞增生。CD8+T淋巴細胞的脫顆粒效應通過細胞內(nèi)的穿孔素減少和細胞表面的CD107+增加來表示。采用流式細胞儀分析和Westernblot分析檢測SV2A在人CD8+T淋巴細胞中的表達。
　　結果:在病毒多肽刺激后2h，高濃度(50 mg/L)和低濃度(50mg/L)的左乙拉西坦均顯著抑制了CD8+T淋巴細胞的穿孔素釋放(LEV50 mg/L vs CEF:25.8±12.9％ vs18.2±9.7％, p＜0.01; LEV

4、5mg/L vs CEF:24.1±13.7％ vs18.2±9.7％，p＜0.01;n=15)和CD107+表達率的增加(LEV50mg/L vs CEF:5.3±2.5％ vs11.5±4.7％, p＜0.01; LEV5mg/L vs CEF:6.7±2.2％ vs11.5±4.7％，p＜0.01;n=15)，但在病毒多肽刺激后5h，僅有高濃度(50 mg/L)的左乙拉西坦保持了針對CD107+表達率增加的抑制效應(LEV50mg

5、/L vs CEF:13.97±4.71％ vs18.43±6.68％，p＜0.05;n=15)。左乙拉西坦對CD8+T淋巴細胞的凋亡和病毒多肽誘導的增生無明顯影響(p＞0.05)。高濃度的丙戊酸鈉(100mg/L)顯著抑制了CD8+T淋巴細胞在體外的自發(fā)性凋亡(VPA100mg/L vs對照組:7.8±3.4％ vs11.5±4.2％，p＜0.01，n=15)，但丙戊酸鈉組未顯示其他具有統(tǒng)計意義的效應差異(p＞0.05)。人CD8+T