Twist1對(duì)人乳腺癌細(xì)胞E-cadherin表達(dá)及成血管能力的影響.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：R 3 6 1密 級(jí)：學(xué)位類(lèi)別： 科學(xué)學(xué)位a 專(zhuān)業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：100 6 2學(xué) 號(hào)：2 0 1 0 6 0 2 0 9 5學(xué)科門(mén)類(lèi)：醫(yī)學(xué)又肄眚科鼻母碩士學(xué)位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I o N論文題目：T w i s t l 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞E - c a & h e r i n 表達(dá)及成血管能力的影響T IT L E E f f e c to f T w i s t lo

2、nt h e E - c a d h e r i ne x p r e s s i o n a n dV a s c u l o g e n i cM i m i c r y o f h u m a n b r e a s t c a r c i n o m a c e l ll i n e一級(jí)學(xué)科：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：病理學(xué)與病理生理學(xué)論文作者：張沖指導(dǎo)教師：孫保存教授導(dǎo)師組成員：張丹芳副教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大

3、學(xué)碩士學(xué)位論文研究目的中文摘要乳腺癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，雖然通過(guò)規(guī)范化治療，早期乳腺癌患者五年生存率達(dá)到9 8 ％，但是，與4 0 年前相比，轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者5 年生存率只從2 0 ％提高至2 6 ％，患者多死于轉(zhuǎn)移，故研究乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要意義。T w i s t 是一種常染色體上的b H L H ( b a s i c h e l i x ．1 0 0 p —h e l i x ) 類(lèi)型的轉(zhuǎn)錄因子，研究發(fā)現(xiàn)T w i s

4、t 在抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用。本研究利用人乳腺癌細(xì)胞系M C F 一7 和M D A —M B ．2 3 1 進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染調(diào)控其T w i s t l的表達(dá)，從而探討轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子T w i s t l 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞上皮鈣粘蛋白( e p i t h e l i a lc a d h e r i n ，E —c a d h e r i n ) 表達(dá)的影響，及對(duì)人乳腺癌細(xì)胞遷移、侵襲和成血管塑形能力的影響

5、。方法1 ． 根據(jù)T w i s t l 表達(dá)水平，選取人乳腺癌細(xì)胞系M C F ．7 和M D A —M B 一2 3 1 ，3 7 ℃、5 ％C 0 2 恒溫培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2 ．低表達(dá)T w i s t l 的M C F ．7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染上調(diào)T w i s t l 表達(dá)質(zhì)粒p c D N A 3 一T w i s t l 獲得T w i s t l 上調(diào)模型，高表達(dá)T w i s t l 的M D A —M B ．2 3 1 細(xì)胞轉(zhuǎn)

6、染下調(diào)T w i s t l 表達(dá)質(zhì)粒p G P ．T w i s t l ．s h R N A 獲得T w i s t l 下調(diào)模型，利用W e s t e r n B l o t 和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)( r e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，R T - P C R ) 分別從蛋白水平和m R N A 水平

7、鑒定轉(zhuǎn)染效果；3 ．利用R T - P C R 檢測(cè)M C F 一7 細(xì)胞上調(diào)T w i s t l 和M D A —M B 一2 3 1 細(xì)胞下調(diào)T w i s t l后E —c a d h e r i n 在m R N A 水平表達(dá)的變化；4 ．利用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)M C F ．7 細(xì)胞上調(diào)T w i s t l 和M D A ．M B ．2 3 1 細(xì)胞下調(diào)T w i s t l 后E ．c a d h e r i n 表達(dá)及亞細(xì)

8、胞定位的變化；5 ．利用劃痕實(shí)驗(yàn)觀(guān)察乳腺癌細(xì)胞M C F 一7 上調(diào)T w i s t l 和M D A —M B 一2 3 1 下調(diào)T w i s t l 后細(xì)胞遷移能力的變化；6 ．T r a n s w e l l 實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)乳腺癌細(xì)胞M C F 一7 上調(diào)T w i s t l 和M D A ．M B ．2 3 1 下調(diào)T w i s t l 后細(xì)胞侵襲能力的變化；7 ．進(jìn)一步利用M a t r i g e l 三維培養(yǎng)模型分析T