胞內(nèi)激活型熒光探針在腫瘤成像中的應(yīng)用及腫瘤靶向輸送基因載體的研究.pdf

1、第一部分:本實驗研究了一種新型的雙功能靶向探針(FA-FITC-CathepsinSubstrate-Dabcyl簡稱FFCD1)用于檢測及定位癌癥細胞。由于Dabcyl高效的熒光共振能量轉(zhuǎn)移淬滅作用，F(xiàn)FCD1在緩沖液中幾乎沒有熒光。但是，F(xiàn)FCD1可以在細胞內(nèi)被激活。對于葉酸受體表達量高的腫瘤細胞，探針FFCD1可以通過葉酸受體介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑進入細胞，隨后細胞內(nèi)的Cathepin B將淬滅劑Dabcyl和FITC切開，從而使FITC

2、釋放出巨大的熒光。利用流式細胞分析技術(shù)及激光共聚焦顯微鏡，分析和觀察不同腫瘤細胞與熒光探針孵育后的結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)FFCD1對葉酸受體高表達的鼻粘膜上皮細胞(KB細胞)具有高度選擇性。同時，KB細胞與不同熒光探針的孵育實驗，也進一步驗證了葉酸配基與腫瘤細胞表面葉酸受體的高特異性結(jié)合能力。FFCD1“自激發(fā)”型熒光探針的特殊構(gòu)造，可以使與其發(fā)生特異性結(jié)合的腫瘤細胞變得可視化，與“永久開放”型探針相比，可以克服正常組織內(nèi)非特異性酶的激活、高熒

3、光背景等缺點，提高腫瘤成像對比度和檢測靈敏度，使其在臨床腫瘤診斷及定位方面具有很大的潛力。
　　第二部分:基于DNA重組技術(shù)，我們設(shè)計和制備了三種多功能基因重組載體(H5WYG-3H1-NLS-TM, TM-4H1-NLS-GALA, KALA-2H1-NLS-TM)，可以靶向轉(zhuǎn)染特異性癌細胞。這種生物聚合物由四部分組成:(1)具有壓縮pDNA能力的、富含精氨酸、組氨酸的重復(fù)序列(H)，(2)靶向HER2受體高表達的癌細胞的序列(

4、TM)，(3) pH敏感的溶膜肽，用于破壞溶酶體膜，增強pDNA運輸至細胞核的效率(FP)，(4)核定位序列(NLS)。本實驗通過對三種載體的制備難度、壓縮pDNA能力、靶向性和細胞毒性的比較，得出TM-4H1-NLS-GALA多功能基因重組載體，可以壓縮pDNA，避免pDNA被核酸酶降解，靶向HER2受體陽性而非陰性的細胞系，并且能夠有效地到靶細胞的細胞核并調(diào)節(jié)基因的表達。TM-4H1-NLS-GALA多功能基因重組載體對細胞沒有明顯