蓽茇酰胺通過誘導ROS抗膠質瘤和抗白血病的作用及其機制.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 蓽茇酰胺抑制膠質母細胞瘤遷移的作用及機制
　　蓽茇酰胺（Piperlongumine, PL）是一種從長柄胡椒中提取的具有藥用價值的天然生物堿。近年來已有研究提示蓽茇酰胺對腫瘤細胞具有殺傷作用，本實驗室也首次報道了蓽茇酰胺對膠質母細胞瘤的殺傷作用。本研究著重于蓽茇酰胺對膠質母細胞瘤細胞遷移的作用及其機制，進一步探討蓽茇酰胺抗膠質母細胞瘤的功能及其機制。
　　本研究采用細胞

2、劃傷模型證明了蓽茇酰胺特異性地抑制腫瘤細胞遷移。利用DCFH-DA染色測定細胞內活性氧水平、微量谷胱甘肽試劑盒測定細胞內谷胱甘肽含量、免疫印跡檢測p-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表達水平，探討了蓽茇酰胺對膠質母細胞瘤細胞遷移的抑制作用的潛在分子機制，并采用Transwell遷移實驗進行了驗證。
　　在機械劃傷后用蓽茇酰胺處理膠質母細胞瘤細胞系（LN229和U87）能明顯抑制劃痕的愈合。而在劃傷前給予蓽茇酰胺（5-10μM

3、）處理6小時可抑制多種腫瘤細胞株(LN229，HepG2，Huh7，Hela，T24)細胞劃傷后遷移，而對原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質細胞遷移則無影響，EdU實驗排除了這一模型中蓽茇酰胺對LN229細胞增殖的影響。蓽茇酰胺能升高LN229細胞內活性氧（ROS）水平，同時降低還原型谷胱甘肽（GSH）含量但對原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質細胞內ROS水平無影響?？寡趸瘎㎞-乙酰基-L-半胱氨酸（NAC）預處理能完全逆轉蓽茇酰胺對LN229細胞遷移的抑制作

4、用。蓽茇酰胺激活LN229細胞內JNK和p38信號通路，而這種激活可被NAC阻斷。LN229細胞過表達p38后細胞遷移能力下降，而p38特異性抑制劑SB203580和JNK特異性抑制劑SP600125能明顯提高LN229細胞的遷移能力。在Transwell遷移實驗中，蓽茇酰胺抑制LN229細胞遷移的作用再次被證實，并且這種作用能被NAC逆轉，被p38和JNK特異性抑制劑減弱。蓽茇酰胺還能增高IκBα的表達，降低NFκB的活性，這種變化同

5、樣受NAC及p38和JNK特異性抑制劑的調控。
　　此外，利用免疫印跡檢測細胞周期相關蛋白，我們發(fā)現(xiàn)蓽茇酰胺降低LN229細胞內細胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin25 homolog C,Cdc25C)及Cdc2蛋白的表達，且這種降低能被NAC預處理阻斷。自噬相關蛋白LC3也可被蓽茇酰胺和NAC調控。這提示蓽茇酰胺還可通過阻滯細胞周期和誘導自噬發(fā)揮其抗膠質母細胞瘤細胞作用。
　　本實驗證

6、明了蓽茇酰胺通過誘導活性氧水平升高，進而激活JNK和p38，從而抑制膠質母細胞瘤細胞遷移。蓽茇酰胺抑制腫瘤細胞遷移及其它抗膠質母細胞瘤的功能可為蓽茇酰胺應用于腫瘤預防和治療提供實驗基礎。
　　第二部分 蓽茇酰胺抗白血病的作用及機制
　　蓽茇酰胺對多種腫瘤細胞具有殺傷作用，本研究收集了10例白血病病人血液標本，探索蓽茇酰胺對白血病病人細胞的作用及其機制。
　　本研究采用MTT的方法測量蓽茇酰胺對白血病病人細胞的活力影響。

7、利用PI染色和流式監(jiān)測細胞死亡。DCFH-DA染色測定細胞內活性氧水平。免疫印跡檢測p-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表達水平，證明了蓽茇酰胺對白血病病人細胞的殺傷功能及潛在分子機制。
　　蓽茇酰胺（10-20μM）可抑制白血病病人細胞活力，引起明顯的細胞凋亡。蓽茇酰胺能升高白血病病人細胞內ROS水平。NAC預處理能完全逆轉蓽茇酰胺誘導的細胞死亡。蓽茇酰胺激活白血病病人細胞內JNK和p38信號通路，而這種激活可被NAC阻斷