蓽茇酰胺通過誘導ROS抗膠質(zhì)瘤和抗白血病的作用及其機制.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 蓽茇酰胺抑制膠質(zhì)母細胞瘤遷移的作用及機制
　　蓽茇酰胺（Piperlongumine, PL）是一種從長柄胡椒中提取的具有藥用價值的天然生物堿。近年來已有研究提示蓽茇酰胺對腫瘤細胞具有殺傷作用，本實驗室也首次報道了蓽茇酰胺對膠質(zhì)母細胞瘤的殺傷作用。本研究著重于蓽茇酰胺對膠質(zhì)母細胞瘤細胞遷移的作用及其機制，進一步探討蓽茇酰胺抗膠質(zhì)母細胞瘤的功能及其機制。
　　本研究采用細胞

2、劃傷模型證明了蓽茇酰胺特異性地抑制腫瘤細胞遷移。利用DCFH-DA染色測定細胞內(nèi)活性氧水平、微量谷胱甘肽試劑盒測定細胞內(nèi)谷胱甘肽含量、免疫印跡檢測p-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表達水平，探討了蓽茇酰胺對膠質(zhì)母細胞瘤細胞遷移的抑制作用的潛在分子機制，并采用Transwell遷移實驗進行了驗證。
　　在機械劃傷后用蓽茇酰胺處理膠質(zhì)母細胞瘤細胞系（LN229和U87）能明顯抑制劃痕的愈合。而在劃傷前給予蓽茇酰胺（5-10μM

3、）處理6小時可抑制多種腫瘤細胞株(LN229，HepG2，Huh7，Hela，T24)細胞劃傷后遷移，而對原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細胞遷移則無影響，EdU實驗排除了這一模型中蓽茇酰胺對LN229細胞增殖的影響。蓽茇酰胺能升高LN229細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平，同時降低還原型谷胱甘肽（GSH）含量但對原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細胞內(nèi)ROS水平無影響。抗氧化劑N-乙?；?L-半胱氨酸（NAC）預處理能完全逆轉(zhuǎn)蓽茇酰胺對LN229細胞遷移的抑制作

4、用。蓽茇酰胺激活LN229細胞內(nèi)JNK和p38信號通路，而這種激活可被NAC阻斷。LN229細胞過表達p38后細胞遷移能力下降，而p38特異性抑制劑SB203580和JNK特異性抑制劑SP600125能明顯提高LN229細胞的遷移能力。在Transwell遷移實驗中，蓽茇酰胺抑制LN229細胞遷移的作用再次被證實，并且這種作用能被NAC逆轉(zhuǎn)，被p38和JNK特異性抑制劑減弱。蓽茇酰胺還能增高IκBα的表達，降低NFκB的活性，這種變化同

5、樣受NAC及p38和JNK特異性抑制劑的調(diào)控。
　　此外，利用免疫印跡檢測細胞周期相關(guān)蛋白，我們發(fā)現(xiàn)蓽茇酰胺降低LN229細胞內(nèi)細胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin25 homolog C,Cdc25C)及Cdc2蛋白的表達，且這種降低能被NAC預處理阻斷。自噬相關(guān)蛋白LC3也可被蓽茇酰胺和NAC調(diào)控。這提示蓽茇酰胺還可通過阻滯細胞周期和誘導自噬發(fā)揮其抗膠質(zhì)母細胞瘤細胞作用。
　　本實驗證

6、明了蓽茇酰胺通過誘導活性氧水平升高，進而激活JNK和p38，從而抑制膠質(zhì)母細胞瘤細胞遷移。蓽茇酰胺抑制腫瘤細胞遷移及其它抗膠質(zhì)母細胞瘤的功能可為蓽茇酰胺應用于腫瘤預防和治療提供實驗基礎(chǔ)。
　　第二部分 蓽茇酰胺抗白血病的作用及機制
　　蓽茇酰胺對多種腫瘤細胞具有殺傷作用，本研究收集了10例白血病病人血液標本，探索蓽茇酰胺對白血病病人細胞的作用及其機制。
　　本研究采用MTT的方法測量蓽茇酰胺對白血病病人細胞的活力影響。

7、利用PI染色和流式監(jiān)測細胞死亡。DCFH-DA染色測定細胞內(nèi)活性氧水平。免疫印跡檢測p-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表達水平，證明了蓽茇酰胺對白血病病人細胞的殺傷功能及潛在分子機制。
　　蓽茇酰胺（10-20μM）可抑制白血病病人細胞活力，引起明顯的細胞凋亡。蓽茇酰胺能升高白血病病人細胞內(nèi)ROS水平。NAC預處理能完全逆轉(zhuǎn)蓽茇酰胺誘導的細胞死亡。蓽茇酰胺激活白血病病人細胞內(nèi)JNK和p38信號通路，而這種激活可被NAC阻斷