蓽茇酰胺通過誘導(dǎo)ROS抗膠質(zhì)瘤和抗白血病的作用及其機(jī)制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
  第一部分 蓽茇酰胺抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移的作用及機(jī)制
  蓽茇酰胺(Piperlongumine, PL)是一種從長柄胡椒中提取的具有藥用價值的天然生物堿。近年來已有研究提示蓽茇酰胺對腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用,本實驗室也首次報道了蓽茇酰胺對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的殺傷作用。本研究著重于蓽茇酰胺對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移的作用及其機(jī)制,進(jìn)一步探討蓽茇酰胺抗膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的功能及其機(jī)制。
  本研究采用細(xì)胞

2、劃傷模型證明了蓽茇酰胺特異性地抑制腫瘤細(xì)胞遷移。利用DCFH-DA染色測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平、微量谷胱甘肽試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量、免疫印跡檢測p-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表達(dá)水平,探討了蓽茇酰胺對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移的抑制作用的潛在分子機(jī)制,并采用Transwell遷移實驗進(jìn)行了驗證。
  在機(jī)械劃傷后用蓽茇酰胺處理膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(LN229和U87)能明顯抑制劃痕的愈合。而在劃傷前給予蓽茇酰胺(5-10μM

3、)處理6小時可抑制多種腫瘤細(xì)胞株(LN229,HepG2,Huh7,Hela,T24)細(xì)胞劃傷后遷移,而對原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移則無影響,EdU實驗排除了這一模型中蓽茇酰胺對LN229細(xì)胞增殖的影響。蓽茇酰胺能升高LN229細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,同時降低還原型谷胱甘肽(GSH)含量但對原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平無影響??寡趸瘎㎞-乙?;?L-半胱氨酸(NAC)預(yù)處理能完全逆轉(zhuǎn)蓽茇酰胺對LN229細(xì)胞遷移的抑制作

4、用。蓽茇酰胺激活LN229細(xì)胞內(nèi)JNK和p38信號通路,而這種激活可被NAC阻斷。LN229細(xì)胞過表達(dá)p38后細(xì)胞遷移能力下降,而p38特異性抑制劑SB203580和JNK特異性抑制劑SP600125能明顯提高LN229細(xì)胞的遷移能力。在Transwell遷移實驗中,蓽茇酰胺抑制LN229細(xì)胞遷移的作用再次被證實,并且這種作用能被NAC逆轉(zhuǎn),被p38和JNK特異性抑制劑減弱。蓽茇酰胺還能增高IκBα的表達(dá),降低NFκB的活性,這種變化同

5、樣受NAC及p38和JNK特異性抑制劑的調(diào)控。
  此外,利用免疫印跡檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白,我們發(fā)現(xiàn)蓽茇酰胺降低LN229細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin25 homolog C,Cdc25C)及Cdc2蛋白的表達(dá),且這種降低能被NAC預(yù)處理阻斷。自噬相關(guān)蛋白LC3也可被蓽茇酰胺和NAC調(diào)控。這提示蓽茇酰胺還可通過阻滯細(xì)胞周期和誘導(dǎo)自噬發(fā)揮其抗膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞作用。
  本實驗證

6、明了蓽茇酰胺通過誘導(dǎo)活性氧水平升高,進(jìn)而激活JNK和p38,從而抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移。蓽茇酰胺抑制腫瘤細(xì)胞遷移及其它抗膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的功能可為蓽茇酰胺應(yīng)用于腫瘤預(yù)防和治療提供實驗基礎(chǔ)。
  第二部分 蓽茇酰胺抗白血病的作用及機(jī)制
  蓽茇酰胺對多種腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用,本研究收集了10例白血病病人血液標(biāo)本,探索蓽茇酰胺對白血病病人細(xì)胞的作用及其機(jī)制。
  本研究采用MTT的方法測量蓽茇酰胺對白血病病人細(xì)胞的活力影響。

7、利用PI染色和流式監(jiān)測細(xì)胞死亡。DCFH-DA染色測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。免疫印跡檢測p-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表達(dá)水平,證明了蓽茇酰胺對白血病病人細(xì)胞的殺傷功能及潛在分子機(jī)制。
  蓽茇酰胺(10-20μM)可抑制白血病病人細(xì)胞活力,引起明顯的細(xì)胞凋亡。蓽茇酰胺能升高白血病病人細(xì)胞內(nèi)ROS水平。NAC預(yù)處理能完全逆轉(zhuǎn)蓽茇酰胺誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。蓽茇酰胺激活白血病病人細(xì)胞內(nèi)JNK和p38信號通路,而這種激活可被NAC阻斷

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