BIRC6在肝癌發(fā)生發(fā)展中的功能研究及其分子機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩64頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、在多細(xì)胞生物中,細(xì)胞通過(guò)有絲分裂途徑產(chǎn)生細(xì)胞的效應(yīng)和通過(guò)凋亡途徑誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡構(gòu)成一種動(dòng)態(tài)平衡。這種精細(xì)平衡的破壞會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。已有明確報(bào)道凋亡逃逸或者對(duì)細(xì)胞死亡的抵抗是腫瘤的標(biāo)志之一。既往研究證實(shí),凋亡抑制蛋白家族(inhibitors ofapoptosis protein,IAPs)是細(xì)胞內(nèi)的一群結(jié)構(gòu)和功能相似的蛋白,是胞質(zhì)分裂、凋亡和信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。IAP家族有8個(gè)成員:Neuronal Apoptosis Inhi

2、bitory Protein(BIRC1/NAIP),Cellular-IAP1(BIRC2/HIAP2/c-IAP1), Cellular-IAP2(BIRC3/HIAP1/c-IAP2), X-linked IAP(XIAP/BIRC4), Survivin(BIRC5), Apollon(BIRC6), Livin(BIRC7/KIAP/ML-IAP)和IAP-like Protein-2(BIRC8/ILP-2)?,F(xiàn)有研究表明,

3、BIRC6與腦癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、幼兒急性淋巴細(xì)胞白血病、前列腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān),但至今鮮有BIRC6和肝細(xì)胞癌之間關(guān)系的報(bào)道。因此,本研究的目的是明確BIRC6在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用,并進(jìn)一步探討其分子作用機(jī)制。本論文分成三個(gè)部分:
  第一部分 BIRC6表達(dá)與人肝癌臨床病理特征的關(guān)系及其對(duì)肝癌發(fā)生與預(yù)后的影響
  我們采用Western

4、blot方法檢測(cè)了BIRC6在40對(duì)癌和癌旁組織中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)BIRC6在癌組織中的表達(dá)上調(diào)明顯高于癌旁組織,經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)驗(yàn)證有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)采用免疫組化染色方法檢測(cè)了BIRC6在160例肝癌組織和相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況,結(jié)果也表明BIRC6在肝癌組織中呈高表達(dá)且高于癌旁組織,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。我們利用x2檢驗(yàn)或Fisher's精確概率法分析所得BIRC6在癌組織中的表達(dá)與ALT、血管侵襲及TNM分級(jí)這三個(gè)HCC危險(xiǎn)因素相關(guān)。用K

5、aplan-Meier(log-rank檢驗(yàn))法進(jìn)行生存分析發(fā)現(xiàn)在癌組織中BIRC6表達(dá)量高的患者術(shù)后生存期短且復(fù)發(fā)率高于表達(dá)量低的患者。隨后,我們采用Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型,對(duì)HCC患者術(shù)后總體生存(overall survival,OS)和至復(fù)發(fā)時(shí)間(time to recurrence,TTR)的相關(guān)危險(xiǎn)因素分別進(jìn)行單因素和多因素分析。結(jié)果顯示,BIRC6在癌組織中的表達(dá)情況是影響肝癌患者根治術(shù)后OS及TTR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這一部分研

6、究提示,BIRC6可能是一個(gè)新的HCC預(yù)后標(biāo)志物。
  第二部分 BIRC6在肝癌發(fā)生發(fā)展中的腫瘤生物學(xué)行為
  本研究部分利用shRNA-BIRC6慢病毒顆粒構(gòu)建了BIRC6下調(diào)的穩(wěn)定細(xì)胞株,并對(duì)其進(jìn)行了體外細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果顯示,與對(duì)照相比,BIRC6下調(diào)能顯著抑制細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,同時(shí)在裸鼠體內(nèi)抑制腫瘤形成,并且能夠與腫瘤靶向治療藥物索拉菲尼構(gòu)成協(xié)同作用。由此說(shuō)明,BIRC6具有促

7、進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和腫瘤形成的能力,結(jié)合第一部分的臨床研究結(jié)果,提示BIRC6在肝癌組織中表達(dá)的增高可能是肝癌術(shù)后預(yù)后不良的原因。
  第三部分 BIRC6促進(jìn)肝癌發(fā)生的相關(guān)機(jī)制探討
  p53作為經(jīng)典的腫瘤抑制基因,在腫瘤增殖和死亡(凋亡)的過(guò)程中發(fā)揮了極為關(guān)鍵的作用。p53的異常在幾乎所有癌癥細(xì)胞中存在,是腫瘤發(fā)病機(jī)理的常見(jiàn)機(jī)制之一。其異常通常由p53基因突變/缺失及基因表達(dá)或功能的異常調(diào)控所致。p53蛋白的活性、表達(dá)和定位

8、主要受轉(zhuǎn)錄后修飾,例如磷酸化、乙?;头核鼗饔玫?。既往文獻(xiàn)報(bào)道,BIRC6結(jié)構(gòu)中C末端的泛素連接酶區(qū)域(UBC,ubiquitin-conjugating enzyme domain)及N末端的棒狀病毒凋亡抑制蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)區(qū)域(BIR,baculovirus inhibition of apoptosis protein repeat domain)賦予了BIRC6作為E2/E3連接酶的特性,由此連結(jié)底物SMAC及caspase-9從

9、而促使其泛素化而降解。另有文獻(xiàn)報(bào)道p53是BIRC6的下游效應(yīng)基因,BIRC6基因下調(diào)后可通過(guò)增加p53的穩(wěn)定性而誘導(dǎo)凋亡,但是BIRC6究竟是怎樣影響P53的穩(wěn)定性的還未得而知。考慮到BIRC6本身是一種E2/E3連接酶,我們推測(cè)其可能會(huì)同Mdrn2、COP1或Pirh等p53的主要調(diào)控因子類似,直接催化p53的泛素化及蛋白酶降解途徑。因此在本研究部分中,我們探討B(tài)IRC6與p53之間是否存在直接相互作用,并且如何實(shí)現(xiàn)這種相互作用。一

10、方面,我們應(yīng)用免疫共沉淀技術(shù)及激光共聚焦技術(shù)證實(shí)了BIRC6和p53之間存在相互作用,另一方面,我們通過(guò)泛素化實(shí)驗(yàn)證實(shí)了BIRC6通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑促進(jìn)p53的降解。
  綜上所述,通過(guò)本研究,我們首次明確了BIRC6具有促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生的作用,并且是影響肝癌患者根治術(shù)后OS及TTR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此外,我們明確了BIRC6通過(guò)泛素化-蛋白酶體途徑降低p53表達(dá)進(jìn)而對(duì)抗凋亡作用并促進(jìn)腫瘤發(fā)生。因此,BIRC6可以作為

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論