Ca(OH)2和Hoshino’s制劑對(duì)豬牙乳頭細(xì)胞增殖和成骨分化的影響.pdf

1、目的：探討氫氧化鈣制劑（Ca(OH)2制劑）和三聯(lián)抗生素制劑（Hoshino’s制劑）對(duì)體外培養(yǎng)的豬牙乳頭細(xì)胞（pDPCs)增殖和成骨分化的影響，以期為臨床使用牙髓血管再生治療時(shí)根管消毒藥物的選擇提供一定的理論依據(jù)。
　　材料和方法：本實(shí)驗(yàn)將第4代pDPCs細(xì)胞分別接種于含15％胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yǎng)液(標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液)、含有10%、1%、0.1% Ca(OH)2制劑濃度的DMEM培養(yǎng)液以及含有0.5%、0.1%、0.05%

2、Hoshino’s制劑濃度的DMEM培養(yǎng)液中，分別記為空白對(duì)照組（A組）、10%Ca(OH)2組（B1組）、1%Ca(OH)2組（B2組）、0.1%Ca(OH)2組（B3組）和0.5%Hoshino’s組（C1組）、0.1%Hoshino’s組（C2組）、0.05%Hoshino’s組（C3組）。①將各組培養(yǎng)液刺激下的第4代pDPCs細(xì)胞分別在培養(yǎng)的第1、3、5、7、9d時(shí)，用CCK-8比色法檢測(cè)各組OD值，比較各組細(xì)胞的增殖情況。②應(yīng)

3、用BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒，定性檢測(cè)各組pDPCs細(xì)胞2周時(shí)堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP)的表達(dá)情況。③通過p–硝基苯磷（p-NPP）ALP試劑盒，定量檢測(cè)各組pDPCs細(xì)胞兩周時(shí)ALP活性。④利用ANOVA（P=0.05）來判斷Ca(OH)2和Hoshino’s制劑對(duì)pDPCs細(xì)胞的增殖與成骨分化是否有影響。
　　結(jié)果：①CCK-8結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)第7d時(shí)，各組細(xì)胞的生長(zhǎng)達(dá)到最高峰；

4、第7d時(shí)，空白對(duì)照組細(xì)胞的增殖速度顯著高于Ca(OH)2組細(xì)胞，提示 Ca(OH)2制劑抑制了pDPCs細(xì)胞的增殖（P<0.05）；體外培養(yǎng)第3d開始，空白對(duì)照組細(xì)胞的增殖速度顯著高于Hoshino’s組細(xì)胞，提示 Hoshino’s制劑可抑制 pDPCs細(xì)胞的增殖，第7d時(shí)0.5%濃度的Hoshino’s組細(xì)胞甚至完全死亡。②BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色實(shí)驗(yàn)顯示，空白對(duì)照組、Ca(OH)2組和Hoshino’s組pDPCs細(xì)胞ALP

5、染色反應(yīng)均為陽(yáng)性，細(xì)胞被染成藍(lán)紫色，各組pDPCs細(xì)胞內(nèi)均有ALP表達(dá)。③p-NPP定量檢測(cè)ALP結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比較，Ca(OH)2和Hoshino’s組pDPCs細(xì)胞的ALP活性明顯上調(diào)，成骨分化能力顯著提高。并且隨著Hoshino’s制劑濃度的增加，pDPCs細(xì)胞單位ALP的表達(dá)有增加的趨勢(shì).
　　結(jié)論：①Ca(OH)2制劑和Hoshino’s制劑均可抑制pDPCs細(xì)胞的增殖；②Ca(OH)2制劑和Hoshino’s