ACAP4磷酸化抑制劑LCD313對肝癌轉(zhuǎn)移抑制作用的體內(nèi)實驗研究.pdf

1、背景與目的:
　　肝癌在全世界性范圍內(nèi)都是一種嚴(yán)重危害人類健康的致死性疾病。在各種惡性腫瘤中,肝癌的發(fā)病率及病死率均較高。盡管以手術(shù)切除為主要手段的肝癌治療手段取得了長足的進(jìn)步,但肝癌的轉(zhuǎn)移一直都制約著肝癌患者的治療效果,包括確診時已出現(xiàn)的和伴隨手術(shù)切除后復(fù)發(fā)的肝癌轉(zhuǎn)移,近90％的肝癌患者因此而最終病死。因此,深入探索肝癌的發(fā)生以及轉(zhuǎn)移的分子學(xué)機制,研發(fā)有效的肝癌治療新方法、新藥物具有重要的實際意義。
　　多種分子及其構(gòu)成的

2、信號網(wǎng)絡(luò)參與了肝癌的發(fā)生展過程的調(diào)控。ACAP4分子是Arf6的特異性GAP酶,可通過對Arf6的調(diào)節(jié)發(fā)揮對肝癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。同時,ACAP4的分子作用受到分子本身一些氨基酸位點磷酸化的調(diào)節(jié)。本研究擬通過動物體內(nèi)小分子肽LCD313對ACAP4磷酸化的抑制作用,探討抑制ACAP4磷酸化對肝癌轉(zhuǎn)移的影響,以及為研發(fā)ACAP4磷酸化抑制藥物對抗肝癌提供依據(jù)。
　　方法與結(jié)果:
　　首先建立一種能夠表達(dá)熒光素酶的肝癌細(xì)

3、胞株MHCC97-H-LUC,并將MHCC97-H-LUC細(xì)胞株進(jìn)行裸鼠肝臟原位移植,通過活體熒光成像系統(tǒng)動態(tài)檢測并量化MHCC97-H-LUC細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長及轉(zhuǎn)移情況,以此建立一種可用來動態(tài)檢測并量化分析裸鼠肝癌原位移植模型。
　　以此模型為基礎(chǔ),通過給予荷瘤裸鼠體內(nèi)注射不同劑量的ACAP4磷酸化抑制劑LCD313,觀察不同藥物劑量組裸鼠體內(nèi)MHCC97-H-LUC細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移的差異,判斷LCD313對肝癌轉(zhuǎn)移的影響作

4、用。通過活體熒光成像檢測裸鼠體內(nèi)MHCC97-H-LUC的發(fā)光量以及病理學(xué)檢測,發(fā)現(xiàn)LCD313確實抑制了肝癌細(xì)胞株MHCC97-H-LUC在裸鼠體內(nèi)的生長及轉(zhuǎn)移。但在一定劑量范圍內(nèi)LCD313,不同藥物劑量對腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用并無明顯差異,而且隨著藥物劑量的進(jìn)一步加大,LCD313表現(xiàn)出對裸鼠的毒副作用。
　　結(jié)論:
　　本實驗改進(jìn)的MHCC97-H-LUC細(xì)胞株是一種良好的工具細(xì)胞,利用活體成像技術(shù)對裸鼠肝癌原位移植的M

5、HCC97-H-LUC細(xì)胞株進(jìn)行檢測,可以精確地反應(yīng)出肝癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長及分布情況,而且通過熒光強度的大小可以間接反應(yīng)移植瘤的體積?？梢詰?yīng)用于裸鼠肝癌原位移植模型的檢測。
　　本實驗表明,LCD313在動物體內(nèi)能夠抑制ACAP4一些氨基酸基團(tuán)特別是Y733位點的磷酸化,進(jìn)而改變ACAP4的分子構(gòu)象,封閉活性基團(tuán),抑制ACAP4的活性。進(jìn)而阻斷了Arf6活性/非活性的周期性循環(huán)、抑制細(xì)胞質(zhì)膜處對細(xì)胞骨架蛋白重排,降低腫瘤細(xì)胞的