Toll樣受體2和4增強IFN-α抗病毒效應機制的初步研究.pdf

1、目的：探討Toll樣受體2和4(TLR2和TLR4)在α-干擾素(IFN-α)抗病毒效應中的作用以及抗病毒蛋白2',5'-OAS和PKR在體外對抗HBV活性的研究。
　　方法：以人肝胚瘤細胞HepG2為細胞模型,通過LPS刺激并聯(lián)合IFN-α處理細胞,以RT-PCR法檢測細胞表面TLR2和TLR4的表達,再以Western blot和RT-PCR檢測HepG2細胞中IFN-αJAK-STAT途徑分子STAT1、STAT2和IRF9

2、的表達,進一步分析IFN-α誘導的MxA、2',5'-OAS、PKR等抗病毒蛋白的表達。
　　以穩(wěn)定轉染HBV全基因組,并能分泌完整HBV病毒顆粒子的肝胚瘤細胞株HepG2.2.15細胞為細胞模型,將未處理的HepG2.2.15細胞作為空白組;將轉染質粒pEGFP-2',5'-OAS的HepG2.2.15細胞作為2',5'-OAS組;將轉染質粒pEGFP-PKR的HepG2.2.15細胞作為PKR組;將同時轉染質粒pEGFP-2'

3、,5'-OAS和pEGFP-PKR的HepG2.2.15細胞的作為共轉染組。Western blot檢測細胞內PKR和2',5'-OAS蛋白的表達,電化學發(fā)光方法檢測HepG2.2.15細胞分泌的HBsAg和HBeAg量;熒光定量PCR法檢測上清液中HBV DNA的量。
　　結果：研究表明,HepG2細胞在LPS的刺激下,細胞表面TLR2、TLR4 mRNA的表達水平升高(P<0.05),而STAT1、STAT2、IRF9等相關信

4、號轉導分子的表達卻無顯著變化;與IFN-α單獨處理相比,LPS和IFN-α聯(lián)合處理HepG2細胞,可使細胞內JAK-STAT途徑信號分子STAT1、STAT2、IRF9及抗病毒蛋白2',5'-OAS、PKR表達增加(P<0.05),而抗病毒蛋白MxA的表達水平無顯著變化(P>0.05)。
　　HepG2.2.15細胞經質粒轉染能夠表達2',5'-OAS、PKR蛋白,且2',5'-OAS組和PKR組細胞上清液中HBsAg和HBeAg

5、的量低于空白對照組(P<0.05)。共轉染組上清液中HBsAg和HBeAg的量明顯低于空白對照組(P<0.01);不過,各組上清液中HBV DNA的表達無顯著性差異。
　　結論：(1)HepG2細胞表面TLR2、TLR4被LPS刺激表達后,可影響細胞內IFN-αJAK-STAT信號轉導途徑,提高抗病毒蛋白PKR和2',5'-OAS的表達,從而增強了IFN-α的抗病毒效應。(2)在體外,抗病毒蛋白PKR和2',5'-OAS具有獨立的