臭氧應激對氣道粘膜細胞群落和粘蛋白表達譜的影響.pdf

1、目的:應用臭氧應激建立哮喘大鼠模型，觀察臭氧應激不同時間大鼠氣道粘膜細胞群落和粘蛋白表達譜的變化，并探討二者之間的關(guān)系，以期進一步解釋氣道粘液高分泌機制，尋找氣道高反應時粘液分泌紊亂的潛在干預靶點，為粘液高分泌性氣道疾病的治療提供一種新思路。
　　方法:①SD大鼠20只，隨機分為正常對照組與臭氧應激組，每組10只。分別檢測兩組大鼠的呼氣相氣道阻力(expiratoryairwayresistance，Re)，支氣管肺泡灌洗液中總蛋

2、白含量測定及細胞計數(shù)和分類;測定血漿IgE含量;肺、支氣管病理切片。②SD大鼠20只，隨機分為5組:正常對照組;臭氧分別應激1、3、5、7天，各為一組，每組4只。分別取每組大鼠相同部位氣管制作標本，采用掃描電鏡方法觀察與正常對照組相比較，臭氧應激不同時間動物氣道上皮細胞群落的變化。③20只SD大鼠隨機分為5組:正常對照組;臭氧分別應激1、3、5、7天，各為一組，每組4只。實時熒光定量PCR(RT-PCR)實驗研究臭氧應激不同時間大鼠氣道

3、中粘蛋白Muc5ac、Muc5bmRNA表達量。制作切片，采用PAS染色結(jié)合免疫圖像分析系統(tǒng)對粘液儲備量進行測定。
　　結(jié)果:①采用臭氧攻擊支氣管上皮細胞形成的變異性氣道高反應性模型，各項指標（Re、BALF中細胞分類計數(shù)、血漿IgE含量、肺和支氣管病理切片）的測定都證實了氣道高反應性的存在;②正常大鼠氣管上皮幾乎全部被纖毛覆蓋，少見或不可見杯狀細胞與Clara細胞和基底細胞。損傷初期纖毛細胞脫落、數(shù)量減少，暴露出Clara細胞。

4、隨著臭氧持續(xù)應激損傷加重，纖毛細胞脫落加劇，Clara細胞數(shù)量減少，杯狀細胞增多，未在纖毛細胞脫落處觀察到杯狀細胞。應激至第7天，杯狀細胞數(shù)密度和比例增加至最多但增幅下降，纖毛細胞減至25‰少見Clara細胞。③RT-PCR:臭氧應激組大鼠氣道內(nèi)粘蛋白Muc5ac、Muc5bmRNA的表達均高于正常對照組，且與臭氧應激時間成正比。PAS:正常大鼠氣道內(nèi)有少量粘液。隨著應激時間延長，粘蛋白染色加深、總量遞增。
　　結(jié)論:氣道高反應模