蜈蚣抗腫瘤蛋白的分離純化與藥理機(jī)制初探.pdf

1、目的: 蜈蚣具有確切的中醫(yī)抗腫瘤臨床基礎(chǔ)。本課題旨在追蹤蜈蚣主要抗腫瘤蛋白，并初步探討蜈蚣蛋白的抗腫瘤藥理機(jī)制。 方法: 1.蜈蚣抗腫瘤蛋白的分離純化研究采用(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀、Septaadex G-25凝膠過濾層析除鹽并粗分、Q Sepharose fast flow離子交換層析、Sephadex G-200凝膠過濾層析對(duì)蜈蚣蛋白進(jìn)行分離純化，并采用MTT法進(jìn)行體外抑瘤活性檢測(cè)，以追蹤蜈

2、蚣主要抗腫瘤活性蛋白。 2.抗腫瘤蛋白組分CG Ⅰ <'1>的藥理機(jī)制研究采用人宮頸癌Hela和胃腺癌BGC-823兩種細(xì)胞株，從誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡與細(xì)胞毒性的角度探索蜈蚣蛋白組分CG Ⅰ的藥理機(jī)制。 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡方面，本論文選取了吉姆薩染色、吖啶橙/溴化乙錠熒光雙染色、吖啶橙染色等形態(tài)學(xué)方法與DNA碎片的瓊脂糖凝膠電泳分析等指標(biāo)。 細(xì)胞毒性方面，本論文選取MTT、乳酸脫氫酶漏出率檢測(cè)和細(xì)胞蛋白質(zhì)含量測(cè)定等指標(biāo)

3、。 結(jié)果: 本實(shí)驗(yàn)研究首次對(duì)蜈蚣抗腫瘤蛋白進(jìn)行了較深入的分離純化。變性凝膠電泳顯示，所得活性最強(qiáng)的蛋白組分含8條清晰條帶。分離純化后的蛋白組分體外抑瘤活性較蜈蚣總蛋白提高了近10倍。 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蜈蚣蛋白組分CG Ⅰ有很強(qiáng)的體外抗宮頸癌Hela細(xì)胞和胃癌BGC-823作用，呈明顯的量效關(guān)系和較明顯的時(shí)效關(guān)系：且CG Ⅰ作用后，細(xì)胞LDH漏出率增高，細(xì)胞中蛋白質(zhì)明顯減少；通過三種染色觀察，該蛋白組分能使細(xì)胞