重組腺病毒介導(dǎo)E2F-shRNA轉(zhuǎn)移抑制人視網(wǎng)膜母細(xì)胞腫瘤生長的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：觀察腺病毒(Adenovirus，Ad)介導(dǎo)E2F—shRNA轉(zhuǎn)移對人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Retlnoblastoma，RB)眼前房移植瘤生長的抑制作用。 研究方法：利用脂質(zhì)體介導(dǎo)編碼E2F—shRNA的表達(dá)質(zhì)粒體外瞬時轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，48小時后Realtime RT—PcR檢測E2F1表達(dá)情況，PI（碘化丙酊)染色檢測細(xì)胞周期各時相細(xì)胞數(shù)量及DNA含量；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)按50moi的劑量分別用Ad_E2F—shRNA(治療組)、A

2、d-E2F-x(x為非治療基因序列，對照組)體外感染表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞，48小時后收集細(xì)胞、計數(shù)，在手術(shù)顯微鏡下分別將2*105經(jīng)上述感染的人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞注射到裸鼠左、右兩側(cè)眼前房內(nèi)。術(shù)后5d起采用熒光體視鏡連續(xù)觀察雙側(cè)眼內(nèi)腫瘤生長情況并拍攝照片，連續(xù)觀察兩周；待鏡下腫瘤充滿眼內(nèi)前房，處死動物，取眼球及腦組織做石蠟包埋，病理切片眼球進(jìn)行HE染色，觀察雙側(cè)腫瘤組織在正常眼組織中所占的面積。 研究

3、結(jié)果：編碼E2F—shRNA的表達(dá)質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞48小時后，Realtlrne RT—PcR篩選到1個能在轉(zhuǎn)錄水平明顯抑制靶基因hE2F1表達(dá)的sh—RNA序列；瞬時轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞48小時后PI（碘化丙酊)染色檢測到轉(zhuǎn)染了hE2F1siRNA的細(xì)胞中s期細(xì)胞數(shù)明顯減少；熒光體視鏡下連續(xù)觀察雙側(cè)眼前房內(nèi)腫瘤生長情況存在明顯差異；眼球組織HE染色示雙側(cè)腫瘤組織所占正常眼的比例存在差異，對照組腫瘤組織面積較大。 研究結(jié)論：能有效抑