

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、背景:胰腺癌惡性程度高,手術(shù)切除率低,術(shù)后復(fù)發(fā)率高,近年來(lái)發(fā)病率逐漸增高?;熢谝认侔┑木C合治療體系中占有非常重要的地位,但遺憾的是大多數(shù)胰腺癌對(duì)化療并不敏感,還有一些胰腺癌在經(jīng)過(guò)數(shù)次化療后迅速耐藥。近年來(lái),由于吉西他濱的臨床應(yīng)用,對(duì)胰腺癌的化療效果有所改善,但總的來(lái)說(shuō),化療的效果并不令人滿意。所以,對(duì)胰腺癌的耐藥機(jī)制進(jìn)行研究就顯得極為重要。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)胰腺癌細(xì)胞的原發(fā)性和繼發(fā)性耐藥機(jī)制進(jìn)行了許多研究,并分別以5-氟尿嘧啶(5-Fu)和阿
2、霉素(ADM)成功誘導(dǎo)了相關(guān)的人胰腺癌耐藥細(xì)胞株。本研究擬進(jìn)一步選取目前治療胰腺癌的一線藥物吉西他濱,誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞株SW1990建立胰腺癌的吉西他濱耐藥細(xì)胞株,并對(duì)比觀察耐藥細(xì)胞和親本細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)特征的變化。 在本實(shí)驗(yàn)室的前期工作中,利用基因芯片技術(shù),對(duì)比分析了人胰腺癌細(xì)胞株SW1990與藥物誘導(dǎo)建立的耐5-Fu的細(xì)胞株SW1990/Fu及耐ADM的細(xì)胞株SW1990/ADM的基因表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)后二者的硫氧還蛋白還原酶
3、基因表達(dá)明顯增高。已知硫氧還蛋白還原酶(thioredoxinreductase,TrxR)具有廣泛的底物特性,在還原型輔酶Ⅱ(NADPH)參與下調(diào)節(jié)多種底物的氧化還原反應(yīng),在氧化還原調(diào)節(jié)和抗氧化防御中起重要作用。硫氧還蛋白系統(tǒng)不僅在細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用,而且在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和耐藥方面亦發(fā)揮重要作用,目前認(rèn)為T(mén)rxR是潛在的抗癌藥物分子靶標(biāo)。RNA干擾現(xiàn)象(RNAinterference,RNAi)——最早發(fā)現(xiàn)于對(duì)
4、線蟲(chóng)的研究,能高效特異地阻斷基因的表達(dá),近來(lái)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,取得了較好的效果。本研究利用這一技術(shù),設(shè)計(jì)并合成抑制TrxR基因表達(dá)的RNAi片段,載入真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒,以期在長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)載體的細(xì)胞株中,雙鏈RNA能夠長(zhǎng)期發(fā)揮阻斷該基因的作用,抑制TrxR的生成,降低TrxR的活性。本實(shí)驗(yàn)期望通過(guò)檢測(cè)并對(duì)比SW1990親本細(xì)胞和吉西他濱、5-氟尿嘧啶及阿霉素誘導(dǎo)的耐藥細(xì)胞的TrxR活性變化,以確定TrxR在耐藥機(jī)制中的作用
5、,并進(jìn)一步檢測(cè)通過(guò)RNAi抑制了TrxR活性的細(xì)胞對(duì)相應(yīng)化療藥物的反應(yīng),以期證實(shí)TrxR在細(xì)胞耐藥機(jī)制中的作用。 方法:1、采用間歇濃度梯度倍增法誘導(dǎo)建立胰腺癌耐藥細(xì)胞株SW1990/GZ;2、通過(guò)光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡對(duì)比觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定和對(duì)比觀察細(xì)胞倍增時(shí)間的變化;應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定和對(duì)比細(xì)胞周期的變化;3、應(yīng)用四唑鹽比色法藥物殺傷實(shí)驗(yàn)(MTT)法檢測(cè)親本細(xì)胞株和耐藥細(xì)胞株對(duì)化療藥物的敏感性變化;4、
6、通過(guò)測(cè)定TrxR的底物DTNB減少的速率來(lái)測(cè)定和對(duì)比親本細(xì)胞株和耐藥細(xì)胞株的TrxR的活性變化;5、應(yīng)用RNAi技術(shù)抑制耐藥細(xì)胞株的TrxR的基因表達(dá)、調(diào)控改變其活性,并以MTT法檢測(cè)抑制前后各細(xì)胞株對(duì)化療藥物的敏感性變化。 結(jié)果和討論:1、經(jīng)過(guò)9個(gè)月的藥物培養(yǎng)后,得到了穩(wěn)定傳代的SW1990/GZ耐藥細(xì)胞株;其形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)特征等均發(fā)生了明顯變化,細(xì)胞變圓、體積縮小、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、顆粒樣物質(zhì)增多及細(xì)胞倍增時(shí)間延長(zhǎng);SW1990/G
7、Z的倍增時(shí)間(29h)長(zhǎng)于SW1990(22h)。2、應(yīng)用MTT法檢測(cè)親本細(xì)胞株和耐藥細(xì)胞株對(duì)化療藥物的敏感性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)耐藥細(xì)胞株SW1990/GZ較親本細(xì)胞株SW1990對(duì)4種化療藥物均顯示出耐藥性顯著增高,二者對(duì)吉西他濱的耐藥性差異高達(dá)509倍。3、對(duì)親本細(xì)胞株和各耐藥細(xì)胞亞系的TrxR活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn),耐藥細(xì)胞的TrxR活性明顯高于SW1990細(xì)胞;各耐藥細(xì)胞之間,TrxR活性也有差異。4、將含有設(shè)定不同序列的RNAi片斷的質(zhì)粒(片段
8、1、2、3、4和D,片段D為對(duì)照片段),分別轉(zhuǎn)染SW1990細(xì)胞和SW1990/GZ細(xì)胞,檢測(cè)TrxR活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn):a、耐藥細(xì)胞株細(xì)胞SW1990/GZ與親本細(xì)胞株細(xì)胞SW1990,轉(zhuǎn)染對(duì)照片斷后,TrxR活性均無(wú)明顯差異,說(shuō)明對(duì)照質(zhì)粒對(duì)TrxR活性無(wú)顯著影響;b、設(shè)定片段2經(jīng)多次轉(zhuǎn)染不能成功;c、SW1990/GZ與SW1990,轉(zhuǎn)染設(shè)定片斷1和片斷3后,TrxR活性變化均無(wú)明顯差異,說(shuō)明這兩個(gè)設(shè)定片斷未能起到RNAi作用,為不合適
9、片斷;d、SW1990/GZ與SW1990,轉(zhuǎn)染設(shè)定片斷4后,TrxR活性均明顯降低,且對(duì)4種化療藥物的耐藥性有不同程度的降低,對(duì)吉西他濱的耐藥性降低最為顯著,說(shuō)明該片斷為合適片斷,能干擾抑制TrxR的基因表達(dá),降低其活性,并且證實(shí)了TrxR的活性改變與化療的耐藥性相關(guān)。 綜上所述,本論文的發(fā)現(xiàn)及結(jié)論為:1、體外濃度梯度遞增法能夠建立穩(wěn)定傳代的胰腺癌耐藥細(xì)胞株,依此本論文首先建立了對(duì)吉西他濱耐藥的胰腺癌細(xì)胞株SW1990/GZ;
10、 2、建立的耐藥細(xì)胞株SW1990/GZ除了對(duì)吉西他濱耐藥以外,還對(duì)其他藥物具有不同程度的耐藥,表現(xiàn)出多藥耐藥現(xiàn)象; 3、TrxR的活性在各耐藥細(xì)胞株SW1990/GZ、SW1990/ADM及SW1990/Fu中均增高,因此,TrxR活性增高可能是胰腺癌細(xì)胞株耐化療藥物的普遍作用機(jī)制之一; 4、選取合適的RNAi片段(RNAi片斷4),通過(guò)RNAi技術(shù)可以部分抑制TrxR的活性,并由此可以降低胰腺癌細(xì)胞的耐藥性,
11、證明TrxR在胰腺癌細(xì)胞株耐藥中的作用。 以上結(jié)果顯示化療可以誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞繼發(fā)性耐藥,因此,胰腺癌首選化療方案的制定對(duì)于化療療效有著重要影響。利用RNAi技術(shù)抑制TrxR的活性可逆轉(zhuǎn)胰腺癌細(xì)胞株對(duì)化療藥物的耐藥作用,有必要在TrxR誘發(fā)耐藥的作用及機(jī)理方面進(jìn)一步研究,并結(jié)合RNAi技術(shù)進(jìn)一步探索治療胰腺癌的新方法和新藥物。 InducedDrugResistanceandExploredtheChangesoftheA
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 吉西他濱耐藥的胰腺癌SW1990細(xì)胞株的建立及相關(guān)特性檢測(cè).pdf
- 熊果酸對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株SW1990的作用及其機(jī)制研究.pdf
- 促紅細(xì)胞生成素降低胰腺癌細(xì)胞株SW1990吉西他濱化療敏感性及其可能機(jī)制.pdf
- 刺參粘多糖對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株SW1990增殖的抑制作用.pdf
- 沉默Matriptase對(duì)胰腺癌細(xì)胞株SW1990及移植瘤生長(zhǎng)的影響.pdf
- 胰腺癌吉西他濱耐藥基因的篩選及Emodin增強(qiáng)吉西他濱治療胰腺癌的研究.pdf
- 大黃素逆轉(zhuǎn)胰腺癌耐藥細(xì)胞株P(guān)anc--1對(duì)吉西他濱化療耐藥的機(jī)制.pdf
- 胰腺癌細(xì)胞抵抗吉西他濱誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的機(jī)制研究.pdf
- 沙利度胺聯(lián)合吉西他濱對(duì)裸鼠胰腺癌細(xì)胞株(SW-1990)皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響.pdf
- 人胰腺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞株中l(wèi)ncRNA表達(dá)譜初步篩選及研究.pdf
- 大黃素在體外逆轉(zhuǎn)胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 褪黑素對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株SW1990生長(zhǎng)及血管生成的影響.pdf
- 吉西他濱調(diào)節(jié)胰腺癌細(xì)胞ABCG2膜表達(dá)誘導(dǎo)耐藥機(jī)制研究.pdf
- 黃芩素聯(lián)合吉西他濱誘導(dǎo)人胰腺癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf
- RNAi沉默APE1-Ref-1增強(qiáng)吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞SW1990化療敏感性的體內(nèi)外研究.pdf
- 負(fù)壓效應(yīng)對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株SW1990轉(zhuǎn)移抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 吉西他濱誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞BxPC-3中凋亡抑制蛋白XIAP表達(dá)的研究.pdf
- MICA在NK細(xì)胞殺傷胰腺癌中的作用以及吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞MICA蛋白脫落的影響.pdf
- 吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞干性的影響及機(jī)制研究.pdf
- 冬凌草甲素通過(guò)下調(diào)NF-κB、XIAP表達(dá)增強(qiáng)吉西他濱對(duì)胰腺癌SW1990的抑瘤效應(yīng).pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論