促紅細胞生成素降低胰腺癌細胞株SW1990吉西他濱化療敏感性及其可能機制.pdf

1、研究背景： 胰腺癌是高度惡性腫瘤之一。吉西他濱單藥化療是晚期胰腺癌標(biāo)準(zhǔn)一線治療，其療效不理想。究其原因之一是胰腺癌化療敏感性低。前期研究我們發(fā)現(xiàn)MDR-1和RRM1在SW1990對吉西他濱化療抵抗中發(fā)揮重要的作用。另外，晚期患者出現(xiàn)貧血多見，輸血或使用促紅細胞生成素(Epo)是改善血紅蛋白水平的有效措施。 Epo主要是通過促進紅細胞的生成，提高患者的血紅蛋白的濃度，減少臨床輸血，達到改善腫瘤患者的生活質(zhì)量，進而提高腫瘤的

2、控制率以及患者的生存期。然而Ⅲ期臨床試驗發(fā)現(xiàn)多種腫瘤患者使用重組人紅細胞生成素后無病生存期及總生存期均下降。2007年FDA發(fā)布警告：建議慎用Epo治療癌性貧血。盡管如此，還是有不少研究發(fā)現(xiàn)Epo不會惡化腫瘤患者的生存。研究發(fā)現(xiàn)促紅細胞生成素受體(EpoR)不僅存在紅系祖細胞胞膜上，而且多種腫瘤細胞同樣表達EpoR。體內(nèi)體外研究還發(fā)現(xiàn)EpoR在腫瘤細胞中可能有功能性表達，影響腫瘤細胞的增殖、凋亡、化放療敏感性以及腫瘤細胞的遠處轉(zhuǎn)移能力。

3、 鑒于目前Epo對腫瘤治療的影響尚不確定，而報道Epo對胰腺癌細胞株產(chǎn)生影響的相關(guān)研究較少，通過體外實驗檢測胰腺癌細胞中是否表達EpoR以及EpoR是否存在功能，可能將為臨床合理應(yīng)用Epo提供一定的實驗依據(jù)。 研究目的： 觀察促紅細胞生成素對胰腺癌細胞株SW1990增殖活性和吉西他濱化療敏感性的影響，并初步探討其中可能的機制。 材料和方法： 1.材料 1)SW1990胰腺癌細胞株購于中山大

4、學(xué)動物中心 2)主要試劑：RPM1640干粉培養(yǎng)基(Gibico-BRL公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，胰蛋白酶(Amresco公司)，重組人紅細胞生成素注射液(麒麟鯤鵬中國生物公司惠贈)，兔抗人EpoR抗體(Santa Cruz公司)，吉西他濱(美國禮來公司惠贈)，四氮唑鹽(Sigma公司)，二甲基亞砜(Sigma公司)，Trizol(invitrogen公司)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TakaRa)，PCR酶(TakaRa)，DA

5、B顯色試劑盒等。 3)主要儀器：Wellscan MK3自動分析酶標(biāo)儀(Labsystem Dragon，美國)，梯度PCR儀(Biomeera，德國)，凝膠成像儀(BXT-20-M)，各種顯微鏡等2.方法免疫細胞化學(xué)法檢測SW1990中EpoR的表達，MTT法檢測Epo對SW1990細胞增殖以及吉西他濱化療敏感性的影響，RT-PCR法檢測Epo對MDR-1、RRM1在SW1990中表達的影響。對各作用組的光密度值、抑制率以及M

6、DR-1/β-actin和RRml/β-actin比值進行多組數(shù)據(jù)的方差分析；并對化療敏感性(抑制率)與腫瘤化療抵抗相關(guān)基因表達強度(MDR-1/β-actin或RRml/β-actinLg值)進行直線相關(guān)性分析；對吉西他濱化療抵抗?jié)舛扰c腫瘤化療抵抗相關(guān)基因表達強度(MDR-1/β-actin或RRml/β-actin比值)進行直線相關(guān)性分析。所有統(tǒng)計過程均由SAS8.0軟件完成。 結(jié)果： 1)EpoR在SW1990細胞

7、中表達。顯微鏡下，棕褐色物質(zhì)主要分布在細胞膜上。 2)0-10U/mlEpo作用組的0D630平均值分別是0.597，0.645，0.690，0.630，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.377)。 3)2—10U/mlEpo處理組吉西他濱對SWl 990的抑制率平均值分別是35.6％、33.1％、29.9％，明顯低于對照組的64.0％，P=0.004。不同濃度Epo處理組抑制率相近，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

8、4)0-10U/mlEpo作用組的MDR—1/β—actin比值分別是0.42，0.58，0.60，0.68；RRMl/β—actin比值分別是1.32，1.64，1.57，1.67。方差分析發(fā)現(xiàn)Epo處理組的MDR-1、RRM1基因表達均明顯高于對照組。P值分別是0.012，0.029。但是，Epo處理組之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義，p>0.05。 5)直線相關(guān)性分析得出，Epo作用后，吉西他濱對SW1990的抑制率與IdDR-1/β

9、—actin和RRml/β—actin的灰度比值均成負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是-0.964(p=0.036)和-0.968(p=0.032)。 6)直線相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)胰腺癌細胞吉西他濱化療抵抗?jié)舛扰cMDR-1/β—actin和RRml/β—actin的灰度比值均呈現(xiàn)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別是0.960(p=0.002)和0.966(p=0.002)。 結(jié)論1)胰腺癌細胞株SW1990表達EpoR； 2)Epo似不能刺激S