胰腺癌預后多因素分析、siRNA干擾TMPRSS4表達對SW1990細胞生長侵襲的影響.pdf

1、第一章：胰腺癌預后多因素分析
　　 前言：胰腺癌為消化系統(tǒng)高度惡性腫瘤，發(fā)病率為癌癥發(fā)病率的2.5％，位于第十位，但死亡率為所有癌癥病人死亡率的6％，位于第四位，中位生存期僅為3～6個月，總的五年生存率不足5％。胰腺癌在確診的時候多半已經(jīng)轉移，而手術為治療胰腺癌的最為有效的手段，僅有15％～20％的可切除率。因此提高胰腺痛早期診斷率和病人生存率為臨床研究的重要課題。
　　 目的：探討胰腺癌的流行病學、臨床特點、實驗室檢查

2、、影像學檢查，為早期診斷提供新思路，探討影響胰腺痛預后的因素，為提高病人生存率提供新方法。
　　 方法：收集2002年1月至2007年1月我院收治的有完整隨訪資料的280例胰腺癌患者，對所有病例進行病例資料收集并隨訪。采用Kaplan-Meier及壽命表計算生存率，log-rank檢驗進行影響預后的單因素分析，對符合條件的納入COX比例風險模型進行多因素分析。
　　 結果：本組病例中，91.8％患者的年齡大于40歲，高峰

3、年齡在50-73歲之間；89.3％患者進行聯(lián)合B超和CT檢查，敏感性分別為70.6％、95.3％，CA-199敏感性為80.8％。中位生存期為(7.00±0.52)個月，1-5年生存率分別為28.0％、9.0％、6.0％、2.0％、1.0％。單因素分析結果提示年齡>65歲、CA-199>均數(shù)、TNM Ⅲ期、Ⅳ期、淋巴結侵犯、大血管侵犯、遠處臟器轉移、非手術治療、KPS評分<60、無黃疸、有腹水、無胰腺病史、體重下降()5Kg、胰體位癌等

4、都是預后不良的因素；COX多因素分析結果表明，治療方式、年齡、TNM分期、KPS評分和有無腹水是影響患者預后的獨立危險因素。
　　 結論：1、胰腺癌惡性程度高，早期診斷率低，確診時僅16.8％有根治性手術機會，55.7％已經(jīng)有遠處轉移，胰腺體尾部癌較胰頭癌更易轉移，轉移最多的器官為肝臟，轉移與性別年齡無關。2、不斷更新的用于胰腺痛的診斷技術并沒有明顯提高早期診斷率與生存率，重視對胰腺癌高危人群的監(jiān)測為胰腺癌早期診斷的可靠方法。<

5、br>　　 第二章：siRNA干擾TMPRSS4表達對SW1990細胞生長侵襲的影響
　　 前言：高度惡性和轉移是胰腺痛的突出特征之一。胰腺為腹膜后位器官，胰腺癌患者早期癥狀缺乏特異性，由于早期診斷困難，療效差。所以，尋找新的治療思路，以提高胰腺痛患者的預后及生活質(zhì)量成為亟待解決的問題。
　　 早期易侵犯周圍組織器官和遠處轉移是胰腺癌的生物特性，同時也是胰腺痛患者預后極差的最主要因為。腫瘤侵襲轉移是一個復雜的過程，目前

6、已闡明的腫瘤侵襲轉移主要是腫瘤細胞侵犯和破壞周圍正常組織的過程，其中細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)降解是腫瘤侵襲轉移的關鍵步驟。以蛋白水解方式來降解細胞外基質(zhì)，為腫瘤細胞轉移鋪平道路，是腫瘤轉移和浸潤的必需步驟，這一過程主要由四類內(nèi)肽酶調(diào)節(jié)，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶和金屬蛋白酶。腫瘤轉移方面的最新研究認為在絲氨酸蛋白酶中，TTSP家族在腫瘤轉移復雜過程中可能有重要作用。Ⅱ型跨膜絲氨

7、酸蛋白酶(type Ⅱ transmembrane serine proteases，TTSP)屬于一類絲氨酸蛋白酶，表達在某些器官和腫瘤組織的細胞表面中，具有潛在的降解細胞膜和細胞外基質(zhì)的功能，從而有利于腫瘤細胞的擴散和轉移。近年來不少研究發(fā)現(xiàn)部分TTSPs在某些腫瘤出現(xiàn)表達改變，認為可能與這些腫瘤細胞的增殖、浸潤和轉移有關。
　　 TMPRSS4是Wallrapp等在2000年從胰腺癌中通過cDNA-RDA方法分離出的糜蛋白

8、家族中的一個新的絲氨酸蛋白酶，屬于TTSP的新成員，在胰腺痛及其他腫瘤中高表達，蛋白結構上具備所有TTSP的結構特征。功能上有胰酶樣活性，可能在腫瘤轉移及腫瘤浸潤中有重要作用。H，jung等人研究證實，TMPRSS4過表達誘導了E-鈣粘蛋白介導的細胞粘連喪失，從而促進表皮細胞/間質(zhì)細胞間過渡，造成痛細胞轉移能力、侵襲性和惡性程度都明顯增加。這些研究結果都提示TMPRSS4正向參與了胰腺癌浸潤轉移的致病過程，但仍需進一步證實。TMPRSS

9、4是否可以作為胰腺癌診斷與預后評價的新指標有待進一步研究。
　　 基于這些研究背景，本實驗擬在已有研究的基礎上，研究胰腺痛組織中TMPRSS4的表達及臨床意義；通過RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術阻斷胰腺痛SW1990細胞中TMPRSSS4基因的功能表達，研究沉默TMPRSS4后細胞的增殖及侵襲行為的變化，為闡明TMPRSS4與胰腺癌浸潤轉移的正向關系提供證據(jù)，并為臨床上胰腺痛TMPRSSS4基因治療

10、提供理論及實驗依據(jù)。
　　 目的：檢測胰腺癌組織中Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶4(type Ⅱ transmembraneserine proteases 4，TMPRSS4)的表達及臨床意義。構建靶向TMPRSS4特異性干擾RNA質(zhì)粒，轉染SW1990細胞后，培養(yǎng)穩(wěn)定的轉染質(zhì)粒的細胞株，研究RNA干擾(RNA interference，RNAi)對胰腺痛SW1990細胞TMPRSS4基因、蛋白以及細胞生長侵襲的影響，為將來進一步研究T

11、MPRSS4在胰腺癌中的生物學功能及胰腺痛抗遷移與侵襲治療提供基礎。
　　 方法：RT-PCR檢測組織中TMPRSS4的表達，初步探討TMPRSS4在胰腺癌病人中表達的差異。構建靶向TMPRSS4基因的小干擾RNA(small interferingRNA，siRNA)真核表達質(zhì)粒載體，轉染SW1990細胞，實時定量PCR(Real-timeQuantitative Polymerase ChainReaction，RQ-PCR

12、)檢測各質(zhì)粒載體對TMPRSS4基因的干擾效率，篩選出干擾效率最高的質(zhì)粒載體，并進行穩(wěn)定克隆篩選培養(yǎng)，Western-blot進一步驗證蛋白表達水平，Transwell小室檢測TMPRSS4沉默后細胞遷移和侵襲能力的改變；CCK-8法檢測TMPRSS4沉默后細胞體外增殖的變化。
　　 結果：9例確診為胰腺癌，TMPRSS4陽性6例，陽性率為66.7％，3例慢性胰腺炎組織TMPRSS4表達均陰性。5例有遠處轉移的胰腺癌組織TMPR

13、SS4表達均陽性，3例無遠處轉移者1例陽性。胰腺癌的遠處轉移組TMPRSS4陽性率高于非轉移組。熒光定量PCR、westen-blot分別檢測TMPRSS4的干擾效率為80.1％、60％。Transwell小室檢測SW1990/p-siTMPRSS4組細胞的遷移抑制率與侵襲抑制率分別為32.1％、24.5％；CCK8檢測空白對照組、空載體組與TMPRSS4組細胞增殖狀態(tài)無明顯差異(P>0.05)。
　　 結論：TMPRSS4的陽