利用數字基因表達譜測序分析雞HSP25基因對細胞凋亡的作用.pdf

1、在哺乳動物小分子熱應激蛋白（sHSPs）家族中，熱應激蛋白25/27kD（HSP25/27）基因的高表達能夠主導聚集體沉積，防止錯誤折疊蛋白之間不可逆結合，從而緩解因內質網受協(xié)迫而造成的細胞凋亡。但卵生動物胚胎各組織中HSP25的序列和結構都異于哺乳動物。在熱應激條件下，雞HSP25基因（cHSP25）高表達是否也起著保護細胞的作用仍不明確。c HSP25在熱應激誘導的細胞凋亡過程中涉及的信號通路未有報導，探究這些通路中的物質變化對闡明

2、卵生動物特有的HSP25基因在細胞凋亡過程中的作用具有重要研究意義。本研究在37℃培養(yǎng)箱對雞成纖維細胞系（DF-1）分別進行干擾和過表達cHSP25基因，通過數字基因表達譜（DGE）分析參與細胞凋亡的相關通路及相應基因的表達情況，利用熱應激（45℃，3 h）處理DF-1，qRT-PCR檢測相關基因和流氏細胞術檢測細胞凋亡和細胞周期。結果表明：
　?。?）干擾組cHSP25基因mRNA相對表達量下降50％；過表達組cHSP25基因m

3、RNA相對表達量升高500倍。
　?。?）DGE測序分析結果揭示，與對照組相比，干擾組只有1個未注釋的下調差異表達基因；過表達組共有95個差異表達基因，其中60個為表達量上調基因，35個為下調基因。與干擾組相比，過表達組共有32個差異表達基因，其中有19個為表達量上調基因，13個為下調基因。雞DF-1過表達cHSP25后，K EGG通路分析發(fā)現，PPARG和 LAMA2富集于癌癥通路等；BDNF富集于嗜中性粒細胞信號通路和經典MA

4、P激酶信號通路。
　?。?）在熱應激處理雞DF-1后，過表達組的HSP27和HSP70基因的表達顯著下降，差異表達基因BDNF、LAMA2和PPARG及其相關通路的下游基因 AKT和NFkB的表達量顯著下調，流氏細胞術檢測發(fā)現，S期細胞數增加，總凋亡細胞數增加。
　　綜上所述，在熱應激條件下，雞 DF-1細胞系 cHSP25基因持續(xù)高表達促使細胞周期停滯和加劇細胞凋亡，其通過下調HSP27和HSP70基因表達，并且抑制BDN