間日瘧原蟲傳播阻斷疫苗新型候選抗原Pvs48的基因測序及分析.pdf

1、瘧疾是瘧原蟲通過媒介昆蟲蚊傳播的人類最嚴重的寄生原蟲感染性疾病。每年，全世界約有5億人感染瘧疾，近200萬人因其死亡，其中大部分為兒童及妊娠婦女。近年來，由于耐藥性蟲株及耐殺蟲劑性蚊的普遍出現(xiàn)，使瘧疾的流行進一步惡化，防瘧、抗瘧形勢更為嚴峻。因此，開發(fā)有效的瘧疾疫苗已成為當今瘧疾防治工作迫切需要解決的課題。 瘧疾疫苗研制的障礙主要在于瘧原蟲復(fù)雜的生活史和廣泛的抗原變異性。因此，有效的特異性疫苗候選抗原的確定已成為疫苗研制開發(fā)的關(guān)

2、鍵。傳播阻斷疫苗是目前瘧疾控制的主要戰(zhàn)略之一。與正在研究的紅前期及紅內(nèi)期疫苗相比，傳播阻斷疫苗的突出特點在于它具有有限的抗原多態(tài)性和較強的免疫原性。配子體作為介導瘧原蟲在媒介昆蟲蚊與人類之間傳播的唯一形式，是傳播阻斷免疫的理想靶位。近年來，引起人們關(guān)注的傳播阻斷疫苗新的候選抗原P48恰恰是表達于配子體表面的特異性蛋白。Pvs48是間日瘧原蟲配子體表面表達的一種主要蛋白，對配子體在蚊胃內(nèi)的存活與發(fā)育起著重要的作用。目前，有關(guān)，Pvs48疫

3、苗候選抗原的研究尚無報道。由于中國及其它亞洲地區(qū)以間日瘧原蟲流行最為廣泛，而間日瘧原蟲和惡性瘧原蟲之間沒有明顯的免疫交叉反應(yīng)性，因此，新的候選抗原Pvs48的分析和評估對于完善間日瘧原蟲傳播阻斷疫苗的研究具有重要的理論和實際意義。 為此，該研究首次對我國單純間日瘧原蟲流行區(qū)浙江、湖北兩省12例間日瘧原蟲分離株的Pvs48全長基因進行了多態(tài)性分析，旨在為間日瘧原蟲傳播阻斷疫苗侯選抗原的確定和研制提供必需的前提依據(jù)。 材料與

4、方法 在瘧疾流行季節(jié)，采集我國單純間日瘧原蟲流行區(qū)浙江、湖北兩省12例瘧原蟲鏡檢陽性患者血樣，提取寄生蟲基因組DNA。以基因組DNA為模板，選取基因特異性引物(primersense：Pvs48-6F5’-GCTCTACCG-GAACCATGTTG-3’；anti-sense：Pvs48-3R5’-TTTCCCTAAAT-CATCGCCTG-3’)。在KOD-PLUS聚合酶作用下通過聚合酶鏈式反應(yīng)PCR擴增Pvs48基因的全長片

5、段，并進行直接測序，利用MacVector軟件(GeneWorks251：OxfordMolecularGroup，Campbell，CA)對序列反應(yīng)的結(jié)果進行分析。 實驗結(jié)果 1.該試驗獲得的Pvs48基因全長1300bp，編碼433個氨基酸。 2.在核苷酸水平我們共發(fā)現(xiàn)6處點突變，并且均為錯義突變(G/A103，C/A631，A/C750，G/T1003，G/A1126，A/G1253)。在氨基酸水平，共發(fā)現(xiàn)

6、6處氨基酸替換(E/K35，H/N211，K/N250，D/Y335，A/T376，K/R418)。 3.核苷酸改變共產(chǎn)生6種基因型(C631-A750，A750-G1003-G1126-A1253，G103-C631-A750-G1126，C631-A750-G1003-G1126-A1253，G103-C631-A750-G1126-A1253，G103-C631-A750-G1003-G1126-A1253)。其中C631

7、-A750-G1003-G1126-A1253基因型，所占比例最大。 討論 該研究首次對我國間日瘧原蟲單純流行區(qū)分離株傳播阻斷疫苗候選抗原Pvs48的基因多態(tài)性特點進行了報道。實驗結(jié)果顯示，Pvs48基因在不同地理株間(湖北、浙江兩省)或同一地域不同分離株之間基因多態(tài)性十分有限，初步證實了Pvs48將成為間日瘧原蟲傳播阻斷疫苗新的候選抗原。 傳播阻斷疫苗是目前控制瘧原蟲感染的一種重要戰(zhàn)略措施。它以有性階段蟲體特異

8、表達的表面蛋白作為抗原免疫人體，使之產(chǎn)生抗有性階段蟲體表面蛋白的特異性抗體。與正在研究的紅前期和紅內(nèi)期疫苗相比，傳播阻斷疫苗最大的特點在于抗原變異少，這一發(fā)現(xiàn)對瘧疾疫苗的研制開發(fā)具有重要意義。眾所周知，瘧疾疫苗研制的主要障礙在于瘧原蟲復(fù)雜的生活史和廣泛的抗原變異性。因此，具有有限抗原變異這一優(yōu)點的傳播阻斷疫苗將具有廣闊的發(fā)展前景。傳播阻斷疫苗與其他階段疫苗或抗瘧藥物的聯(lián)合應(yīng)用將可能會成為防瘧、抗瘧的主導措施。 配子體作為介導瘧原