人ATP結(jié)合盒超家族蛋白相互作用蛋白的規(guī)?；l(fā)掘.pdf

1、ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[TheATP-bindingcassette(ABC)transportersuperfamily]屬于一類分布廣泛、數(shù)目眾多的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)體系。它們可以轉(zhuǎn)運(yùn)代謝產(chǎn)物、離子、糖、氨基酸、脂類、固醇以及藥物等多種底物通過(guò)細(xì)胞內(nèi)、外膜。一些特定的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在多藥耐性的腫瘤細(xì)胞系或癌癥過(guò)表達(dá)，與臨床耐藥密切相關(guān)。這些基因的突變可能直接和間接導(dǎo)致多種遺傳疾病。而目前關(guān)于ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白具體轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制以及功能還

2、未完全了解。關(guān)于其與細(xì)胞內(nèi)蛋白的相互作用研究甚少。規(guī)?；M(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用研究可能發(fā)現(xiàn)其更精確的轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)機(jī)制并揭示新的功能。 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是一切生命活動(dòng)的基礎(chǔ)，揭示相互作用規(guī)律是認(rèn)識(shí)生命奧秘的必經(jīng)之路。酵母雙雜交技術(shù)是目前應(yīng)用最成功的大規(guī)模研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)平臺(tái)，規(guī)模化酵母雙雜交技術(shù)不是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室酵母雙雜交技術(shù)在誘餌數(shù)量上的簡(jiǎn)單增加，需要解決大量的技術(shù)問(wèn)題。本文以ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白為研究對(duì)象，摸索規(guī)模化酵

3、母雙雜交研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)條件，優(yōu)化各關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，完善可用于規(guī)?；鞍紫嗷プ饔醚芯康慕湍鸽p雜交技術(shù)平臺(tái)；發(fā)現(xiàn)20對(duì)高可信的蛋白相互作用。結(jié)果對(duì)采用酵母雙雜交技術(shù)規(guī)?；芯康鞍踪|(zhì)相互作用提供可借鑒的經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)的相互作用有助于揭示ABC蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，并為其新功能的認(rèn)識(shí)提供重要的功能線索。 本文采用酵母雙雜交技術(shù)，選取具有重要功能，代表6類亞家族的14種ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCA1、ABCA5、ABCA6、ABCB1

4、、ABCB11、ABCB4、ABCC1、ABCC13、ABCC2、ABCC3、ABCC5、ABCC6、ABCF1、ABCG8的胞質(zhì)區(qū)(C端或者N端)為誘餌，篩選成人肝cDNA文庫(kù)，得到67種不同的相互作用。在對(duì)相互作用數(shù)據(jù)的初步分析中，除去不符合讀框和常見(jiàn)假陽(yáng)性，經(jīng)過(guò)回轉(zhuǎn)驗(yàn)證，得到20對(duì)可信度較高的相互作用。這些相互作用提示ATP結(jié)合盒超家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可能有許多新的功能，同時(shí)也揭示可能存在共同的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。如發(fā)現(xiàn)ABCC2與NF-κB1的相

5、互作用，提示ABBC2可能作為一個(gè)受體，參與NF-κB信號(hào)通路的激活和調(diào)節(jié)。 用GO(geneontology)進(jìn)行功能注釋，發(fā)現(xiàn)相互作用蛋白中有參與物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的，也有參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等其它生理學(xué)過(guò)程的，表明ABC蛋白除了發(fā)揮物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的功能外，還可能參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、增殖等過(guò)程調(diào)控。 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是一切生命活動(dòng)的基礎(chǔ)，揭示相互作用規(guī)律是認(rèn)識(shí)生命奧秘的必經(jīng)之路。蛋白質(zhì)相互作用研究從規(guī)模上分為單個(gè)相互作用研