以BMP-2為靶位促成骨細(xì)胞分化及以Cathepsin K為靶位抑制破骨細(xì)胞降解作用的兩個新型抗骨質(zhì)疏松藥物篩選模型的研究.pdf

1、第一部分本課題從人體內(nèi)膽固醇代謝機制和細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路的作用機制出發(fā),將快捷靈敏的微生物測試法和基于細(xì)胞水平上的準(zhǔn)確性較高的促BMP-2表達上調(diào)檢測方法相結(jié)合,建立了篩選新模型,克服了單一細(xì)胞模型不宜篩選來源廣泛、成分復(fù)雜的天然產(chǎn)物庫的局限性,更加適合現(xiàn)代高通量藥物篩選的需要.篩選得到的鄰巰乙基苯甲醛衍生物為首次被發(fā)現(xiàn)具有BMP-2表達上調(diào)的作用的化合物,為抗骨質(zhì)疏松藥物的研發(fā)開辟了新思路,其藥理和毒理活性值得進一步闡明.第二部分我們建

2、立了一個有效評估組織蛋白酶K抑制劑的檢測方法來篩選抗骨質(zhì)疏松藥物.為了得到純化的組織蛋白酶K,首先通過mRNA逆轉(zhuǎn)錄從人骨瘤細(xì)胞MG63中得到987kb的組織蛋白酶K cDNA全長序列并測序驗證.組織蛋白酶K在IPTG誘導(dǎo)下在E.coli細(xì)胞中大量表達,經(jīng)過復(fù)性和純化后得到單一條帶.Western雜交顯示了蛋白的特異性.初篩以抑制木瓜蛋白酶的活性為指標(biāo),經(jīng)篩選從1000株真菌中得到9株具有較強抑制效應(yīng)的真菌,復(fù)篩采用對純化的組織蛋白酶K