Anti-MUC-1(ScFv)靶向的慢病毒高效轉(zhuǎn)導(dǎo)自殺基因治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、山東醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AntiMUC1(ScFv)靶向的慢病毒高效轉(zhuǎn)導(dǎo)自殺基因治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名：宋莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科指導(dǎo)教師：孔北華劉春生2000.5.1結(jié)果：磷酸鈣沉淀法可有效將上述質(zhì)粒轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞。熒光顯微鏡下觀察到大量綠色熒光蛋白(greenfluorescenceprotein，GFP)表達(dá)。透射電鏡下觀察到大量濃縮后病毒顆粒，熒光分光光度計(jì)檢測(cè)到510nm處有一很高的吸收峰，也證實(shí)有大量病毒顆粒存在

2、。熒光顯微鏡下觀察到Anti—mileI(ScFv)介導(dǎo)的慢病毒對(duì)共培養(yǎng)的SKOV3(mllc1一)和GF(muc1‘)細(xì)胞的感染有明顯差別，非Antimuc—l(ScFv)介導(dǎo)的r幔病毒對(duì)共培養(yǎng)的SKOV3(muc1)和GF(mUC1‘)的感染末見(jiàn)顯著性差別，證明AntimucI(ScFv)介導(dǎo)的慢病毒可對(duì)mile1’的卵巢癌細(xì)胞靶向性轉(zhuǎn)染。病毒感染前加入antimuc1單抗則可抑制病毒靶向性感染。此競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)表明病毒感染是由其抗體

3、組成部分介導(dǎo)，故有抗體導(dǎo)向性。PCR、RTPCR均顯示600bp的陽(yáng)性條帶，證明HSVtk已在靶細(xì)胞SKOV3中整合且轉(zhuǎn)錄表達(dá)。光鏡下觀察到HSVtk轉(zhuǎn)錄后的細(xì)胞在GCV作用后出現(xiàn)明顯形態(tài)變化；MTT法顯示GCV對(duì)轉(zhuǎn)導(dǎo)HSVtk后的SKOV3細(xì)胞有顯著殺傷作用，對(duì)與之共培養(yǎng)且共轉(zhuǎn)染的GF則殺傷作用很小，二者IC。有顯著性差異。f／7結(jié)論：Anti—mile—I(ScFv)介導(dǎo)的慢病毒可將HSVtl(基因高效、靶向性轉(zhuǎn)染mac一1卵巢上皮

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