人動脈粥樣硬化病變及培養(yǎng)平滑肌細胞中環(huán)氧合酶2表達的實驗研究.pdf

1、研究背景：環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)及其代謝產(chǎn)物在炎癥性疾病中起著重要作用，可能是防治動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)或急性冠脈綜合征(ACS)潛在的新靶點。而C反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotein，CRP)不但可以作為介質(zhì)直接誘導(dǎo)炎癥，而且可以直接參與影響AS各個病理階段，促進AS的發(fā)展。增強CRP及其相關(guān)炎癥因子的活化可能提示炎癥反應(yīng)和斑塊不穩(wěn)定性之間存在一定聯(lián)系。但是目

2、前AS的發(fā)病機制研究中COX-2和CRP的關(guān)系尚不清楚。目前他汀類藥物和阿司匹林是調(diào)節(jié)AS炎癥免疫反應(yīng)的重要抗炎藥物，聯(lián)合治療AS可能對相關(guān)機制的揭示有所幫助。 目的：觀察AS病變中COX-2和CRP的關(guān)系；觀察他汀類藥物和阿司匹林單獨和聯(lián)合作用對血管平滑肌細胞中COX-2表達的影響 方法：本實驗用免疫組織化學(xué)方法研究68份人各期動脈AS標本中COX-2和CRP的表達分布情況，同時觀察部分標本中CD31、CD68和α-a

3、ctin的表達情況。比較COX-2和CRP的表達部位、程度并觀察兩者之間是否存在相關(guān)性，以探討COX-2、CRP與AS病變以及AS斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系。同時對人臍動脈平滑肌細胞(HUASMCs)進行體外培養(yǎng)，通過細胞免疫化學(xué)染色和RT-PCR方法從蛋白、基因兩個水平觀察CRP誘導(dǎo)HUASMCs表達COX-2的情況，阿司匹林和氟伐他汀分別及聯(lián)合用藥對COX-2表達的影響。 結(jié)果：1、COX-2和CRP主要在AS斑塊處共同表達，在內(nèi)

4、皮細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞均可見表達；正常動脈未見COX-2和CRP表達，在AS早期病變和晚期病變其表達量明顯高于正常動脈(分別為P＜0.05和P＜0.001)，而早期和晚期之間無明顯差異(P＞0.05)；COX-2和CRP兩者表達程度顯著相關(guān)(P＜0.05，R=0.224)，提示在AS發(fā)病機制中兩者之間可能存在潛在關(guān)系。2、CRP能夠刺激HUASMCs誘導(dǎo)COX-2的基因和蛋白水平的表達，與空白對照組比較，隨著CRP作用濃度的增加，

5、COX-2mRNA表達明顯增加(P＜0.05)，呈劑量依賴性關(guān)系。 3、HUASMCs經(jīng)CRP(10μg/ml)和不同濃度阿司匹林、氟伐他汀及兩者聯(lián)合用藥作用24小時后，RT-PCR、免疫組化方法半定量檢測HUASMCs中均有COX-2mRNA表達和蛋白表達。阿司匹林(0.5mM,1mM，2mM和5mM)和氟伐他汀(0.1μM,1μM和10μM)均能使CRP誘導(dǎo)的COX-2表達明顯減少(p＜0.05)；阿司匹林2mM加氟伐他汀1

6、μM聯(lián)合應(yīng)用較分別應(yīng)用抑制作用增強(p＜0.05)。 結(jié)論：1、COX-2和CRP均參與了AS病理發(fā)生以及易損斑塊中的炎癥反應(yīng)過程，兩者之間存在潛在關(guān)系。抑制COX-2有望成為防抗AS、特別是使斑塊穩(wěn)定的新靶點。 2、不同濃度CRP能夠刺激誘導(dǎo)HUASMCs誘導(dǎo)COX-2的基因和蛋白水平的表達，呈劑量依賴性關(guān)系。推測兩者之間存在潛在關(guān)系。 3、阿司匹林和氟伐他汀分別及兩者聯(lián)合用藥均使CRP誘導(dǎo)的COX-2mRNA