博爾納病病毒磷蛋白對(duì)神經(jīng)細(xì)胞增殖和酪氨酸羥化酶表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的：博爾納病病毒（Borna Disease Virus，BDV）是一種嗜神經(jīng)性、單股負(fù)鏈RNA病毒，其宿主可能包括馬和羊等所有溫血?jiǎng)游?。目前研究表明BDV感染可能與人類神經(jīng)精神疾病相關(guān)，但確切關(guān)系和發(fā)病機(jī)制不清，一直是近年來研究的焦點(diǎn)之一。BDV磷蛋白（phosphoprotein，P24）在感染動(dòng)物的腦組織中含量豐富，是BDV核糖核蛋白體的中心蛋白，在病毒感染過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過建立持續(xù)表達(dá)BDV P24的細(xì)胞模型

2、，初步探討B(tài)DV P24對(duì)PC-12細(xì)胞增殖和酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）表達(dá)的影響，為進(jìn)一步研究BDV的致病機(jī)制提供依據(jù)。 方法： 1.用陽離子脂質(zhì)體方法將含有BDV P24基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1-P24轉(zhuǎn)染到神經(jīng)源性的PC-12細(xì)胞中，經(jīng)G418篩選得到穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞模型，用熒光顯微鏡和RT-PCR鑒定BDV P24在PC-12細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。 2.觀察轉(zhuǎn)染pEGFP

3、-N1-P24的細(xì)胞與轉(zhuǎn)染pEGFP-N1空質(zhì)粒對(duì)照和未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，用MTT檢測(cè)上述各組細(xì)胞增殖活性的變化，用免疫熒光和Fluorescent real-time PCR的方法檢測(cè)TH在各組細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)果： 1.成功建立持續(xù)表達(dá)BDV P24的細(xì)胞模型。用熒光顯微鏡觀察可見BDV P24主要表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)；PCR結(jié)果顯示只有穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-P24的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄BDV P24片段，轉(zhuǎn)染pEGFP-N1

4、空質(zhì)粒的細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞內(nèi)均沒有。 2.BDV P24抑制PC-12細(xì)胞的增殖。用MTT的方法檢測(cè)三組細(xì)胞的增殖活性，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-P24的細(xì)胞增殖活性最差，其次為轉(zhuǎn)染pEGFP-N1空質(zhì)粒的細(xì)胞，而未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞增殖活性不受影響，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.BDV P24促進(jìn)TH的表達(dá)。用免疫熒光和real-time PCR的方法檢測(cè)TH的表達(dá)，結(jié)果一致顯示TH在轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-P24的細(xì)胞中表達(dá)量