G1后期細(xì)胞易被Fas誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　課題小組前期研究發(fā)現(xiàn)G1后期細(xì)胞易被Fas誘導(dǎo)凋亡，本研究通過(guò)Hoechst33342染料對(duì)細(xì)胞DNA進(jìn)行染色，通過(guò)流式細(xì)胞儀分選出高純度G0/G1期和S期細(xì)胞。分別測(cè)定G0/G1期細(xì)胞和S期細(xì)胞中抑制凋亡分子的表達(dá)來(lái)闡明G1后期細(xì)胞易被Fas誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制。本研究的意義在于從分子水平闡明凋亡與細(xì)胞周期之間的內(nèi)在關(guān)系，闡明細(xì)胞凋亡窗口期的分子機(jī)制。
　　方法：
　　利用Hoechst33342染料分別對(duì)MM

2、L-1、PEER淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行DNA染色，通過(guò)流式細(xì)胞儀分選出細(xì)胞的DNA倍數(shù)不同的G0/G1期和S期細(xì)胞，對(duì)照組為未分選組。測(cè)定G0/G1期細(xì)胞、S期細(xì)胞和未分選組細(xì)胞Fas（終濃度50ng/ml）誘導(dǎo)凋亡（0hr、2hr、4hr）時(shí)的細(xì)胞凋亡率。通過(guò)超聲裂解法提取G0/G1期細(xì)胞、S期細(xì)胞和未分選組細(xì)胞胞漿蛋白，Western blotting測(cè)定抑制凋亡分子FLIP、Bcl-2的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　（1） MML-

3、1、PEER細(xì)胞Fas誘導(dǎo)凋亡時(shí)的細(xì)胞凋亡率結(jié)果：MML-1、PEER細(xì)胞G0/G1期及S期分別經(jīng)Fas誘導(dǎo)凋亡0hr、2hr、4hr后測(cè)定細(xì)胞凋亡率。MML-1分選后S期細(xì)胞在Fas誘導(dǎo)凋亡0hr、2hr、4hr的凋亡率分別為27.8％，32.4%和45.4%；而分選后G0/G1期的凋亡率分別為18.9%，29.0%和30.3%。S期細(xì)胞較G0/G1期細(xì)胞易被Fas誘導(dǎo)凋亡。PEER分選后S期細(xì)胞在Fas誘導(dǎo)凋亡0hr、2hr、4hr

4、的凋亡率分別為37.2%，52.8%和73.4%；而分選后G0/G1期的凋亡率分別為40.7%，48.2%和63.5%。從凋亡率可以判斷S期細(xì)胞較G0/G1期細(xì)胞更易被Fas誘導(dǎo)凋亡。
　?。?）MML-1、PEER細(xì)胞FLIP蛋白表達(dá)結(jié)果：FLIP蛋白在G0/G1期細(xì)胞的表達(dá)較S期細(xì)胞、未分選組細(xì)胞顯著增加，S期細(xì)胞和未分選組細(xì)胞的FLIP蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。FLIP蛋白的表達(dá)在G0/G1期最高，細(xì)胞進(jìn)入S期后表達(dá)降低。

5、　　（3）MML-1、PEER細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)結(jié)果：Bcl-2蛋白在G0/G1期細(xì)胞的表達(dá)較S期細(xì)胞、未分選組細(xì)胞顯著降低，S期細(xì)胞和未分選組細(xì)胞的Bcl-2蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。Bcl-2蛋白的表達(dá)在G0/G1期最低，細(xì)胞進(jìn)入S期后表達(dá)增多。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)，S期細(xì)胞較G0/G1期細(xì)胞易被Fas誘導(dǎo)凋亡。細(xì)胞凋亡抑制分子FLIP蛋白水平在G1后期迅速下調(diào)，而分子Bcl-2蛋白水平在G1后期迅速回調(diào)。FLIP