恩諾沙星、蘇丹紅及氯霉素殘留的酶聯(lián)免疫檢測方法的建立.pdf

1、近年來，社會經濟發(fā)展迅猛，人們的生活水平得到了很大的提高，人們對各種食品的需求量也越來越大，因此，一些不法養(yǎng)殖戶和商販在食品中會非法添加一些獸藥以提高產量或美化外觀。恩諾沙星、蘇丹紅及氯霉素等由于價格低廉、添加后效果好，常被非法添加到食品中。這些藥物添加后的殘留可能有潛在的致癌性，致畸性或使人及動物產生耐藥性，因此這些藥物的殘留得到了各國食品安全部門的重視。為了給消費者提供一個安全的食品環(huán)境，各國都建立了一些檢測藥物殘留的方法，如：高效

2、液相色譜法(HPLC)，氣相色譜-質譜聯(lián)用法(GC-MS)等。但是這些儀器方法通常價格都很昂貴，并且樣品處理復雜、耗時長，因此在日常快速檢測中不易普及。酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)由于其快速、靈敏度高等優(yōu)點，受到各國分析者的青睞，應用前景廣泛，在此基礎上建立的磁分離方法(MAIA)，結合了抗原抗體反應的專一性及磁分離的高效性，使得此方法具有更高的靈敏度及應用前景。本研究主要進行了恩諾沙星及蘇丹紅的酶聯(lián)免疫分析及氯霉素的兩種磁分離方法

3、的比較。
　　 恩諾沙星殘留的檢測方法已經很多了，本試驗主要運用恩諾沙星的試劑盒檢測市場上銷售的多種動物源性食品，以確定商品的質量。經檢測，恩諾沙星試劑盒的靈敏度(IC50)為3.237 ng.mL－1，檢測限為0.42 ng.mL－1，工作曲線范圍為0.5-13.5 ng.mL－1。樣本的檢測結果為：市售動物源性食品中，肝臟中恩諾沙星的殘留量較大。
　　 對于蘇丹紅，其抗原通過戊二醛的方法合成，免疫原用牛血清白蛋白(B

4、SA)與半抗原偶聯(lián)，包被抗原用卵清蛋白(OVA)與半抗原偶聯(lián)，制備完成后，用制得的免疫原免疫Balb/c小鼠，經過一系列步驟制得單克隆抗體。再經過一系列的條件優(yōu)化，建立間接競爭ELISA法評價抗體：靈敏度(IC50)為1.7 ng.mL－1，工作曲線的線性范圍為0.5-13.5 ng.mL－1，抗體的專一性較好，在辣椒油中的回收率為82％-91.8%，在辣椒醬中的回收率為59%-103.8%，批內變異系數(shù)在6.5-8.8%之間，批間變異

5、系數(shù)為7.7%左右。本試驗與其它的抗原合成方法相比，本方法更為簡單，中間步驟少，產率較高，能很好的用于ELISA檢測。
　　 對于氯霉素，通過兩種磁分離方法評價抗體，比較了這兩種方法的優(yōu)劣。用普通ELISA方法檢測時，抗體的靈敏度(IC50)為0.72 ng.mL－1；用第一種磁分離方法(MethodⅠ)檢測時，抗體的靈敏度為0.05 ng.mL－1，工作曲線范圍為0.005-5.0 ng.mL－1:用第二種磁分離方法(Meth

6、odⅡ)檢測時，抗體的靈敏度(IC50)為0.4 ng.mL－1，工作曲線的范圍為0.01-5.0 ng.mL－1。兩種方法檢測牛奶中氯霉素的回收率為80-106%，變異系數(shù)為4.7-15%，兩種方法相比，MethodⅠ的靈敏度更高，線性范圍更廣，但是MethodⅡ的操作更簡單，更適于日常檢測，可以開發(fā)成為一種通用試劑。
　　 通過對這幾種藥物的分析研究，我們成功的制備了蘇丹紅的單克隆抗體，并建立了這幾種藥物的酶聯(lián)免疫吸附分析方