恩諾沙星、蘇丹紅及氯霉素殘留的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立.pdf

1、近年來(lái)，社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展迅猛，人們的生活水平得到了很大的提高，人們對(duì)各種食品的需求量也越來(lái)越大，因此，一些不法養(yǎng)殖戶和商販在食品中會(huì)非法添加一些獸藥以提高產(chǎn)量或美化外觀。恩諾沙星、蘇丹紅及氯霉素等由于價(jià)格低廉、添加后效果好，常被非法添加到食品中。這些藥物添加后的殘留可能有潛在的致癌性，致畸性或使人及動(dòng)物產(chǎn)生耐藥性，因此這些藥物的殘留得到了各國(guó)食品安全部門(mén)的重視。為了給消費(fèi)者提供一個(gè)安全的食品環(huán)境，各國(guó)都建立了一些檢測(cè)藥物殘留的方法，如：高效

2、液相色譜法(HPLC)，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)等。但是這些儀器方法通常價(jià)格都很昂貴，并且樣品處理復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)，因此在日?？焖贆z測(cè)中不易普及。酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)由于其快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，受到各國(guó)分析者的青睞，應(yīng)用前景廣泛，在此基礎(chǔ)上建立的磁分離方法(MAIA)，結(jié)合了抗原抗體反應(yīng)的專(zhuān)一性及磁分離的高效性，使得此方法具有更高的靈敏度及應(yīng)用前景。本研究主要進(jìn)行了恩諾沙星及蘇丹紅的酶聯(lián)免疫分析及氯霉素的兩種磁分離方法

3、的比較。
　　 恩諾沙星殘留的檢測(cè)方法已經(jīng)很多了，本試驗(yàn)主要運(yùn)用恩諾沙星的試劑盒檢測(cè)市場(chǎng)上銷(xiāo)售的多種動(dòng)物源性食品，以確定商品的質(zhì)量。經(jīng)檢測(cè)，恩諾沙星試劑盒的靈敏度(IC50)為3.237 ng.mL－1，檢測(cè)限為0.42 ng.mL－1，工作曲線范圍為0.5-13.5 ng.mL－1。樣本的檢測(cè)結(jié)果為：市售動(dòng)物源性食品中，肝臟中恩諾沙星的殘留量較大。
　　 對(duì)于蘇丹紅，其抗原通過(guò)戊二醛的方法合成，免疫原用牛血清白蛋白(B

4、SA)與半抗原偶聯(lián)，包被抗原用卵清蛋白(OVA)與半抗原偶聯(lián)，制備完成后，用制得的免疫原免疫Balb/c小鼠，經(jīng)過(guò)一系列步驟制得單克隆抗體。再經(jīng)過(guò)一系列的條件優(yōu)化，建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法評(píng)價(jià)抗體：靈敏度(IC50)為1.7 ng.mL－1，工作曲線的線性范圍為0.5-13.5 ng.mL－1，抗體的專(zhuān)一性較好，在辣椒油中的回收率為82％-91.8%，在辣椒醬中的回收率為59%-103.8%，批內(nèi)變異系數(shù)在6.5-8.8%之間，批間變異

5、系數(shù)為7.7%左右。本試驗(yàn)與其它的抗原合成方法相比，本方法更為簡(jiǎn)單，中間步驟少，產(chǎn)率較高，能很好的用于ELISA檢測(cè)。
　　 對(duì)于氯霉素，通過(guò)兩種磁分離方法評(píng)價(jià)抗體，比較了這兩種方法的優(yōu)劣。用普通ELISA方法檢測(cè)時(shí)，抗體的靈敏度(IC50)為0.72 ng.mL－1；用第一種磁分離方法(MethodⅠ)檢測(cè)時(shí)，抗體的靈敏度為0.05 ng.mL－1，工作曲線范圍為0.005-5.0 ng.mL－1:用第二種磁分離方法(Meth

6、odⅡ)檢測(cè)時(shí)，抗體的靈敏度(IC50)為0.4 ng.mL－1，工作曲線的范圍為0.01-5.0 ng.mL－1。兩種方法檢測(cè)牛奶中氯霉素的回收率為80-106%，變異系數(shù)為4.7-15%，兩種方法相比，MethodⅠ的靈敏度更高，線性范圍更廣，但是MethodⅡ的操作更簡(jiǎn)單，更適于日常檢測(cè)，可以開(kāi)發(fā)成為一種通用試劑。
　　 通過(guò)對(duì)這幾種藥物的分析研究，我們成功的制備了蘇丹紅的單克隆抗體，并建立了這幾種藥物的酶聯(lián)免疫吸附分析方