牛尿中玉米赤霉醇殘留酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、該研究采用混合酸酐法制備了玉米赤霉醇(Zeranol,ZER)免疫原,免疫BALB/c小鼠,用間接酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對抗體效價進行了檢測,并建立了ELISA檢測方法.ZER免疫原(ZER-7-半琥珀酸酯-BSA,以下簡稱Z7BSA)中半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)比為10:1,包被原(ZER-7-半琥珀酸酯-OVA,以下簡稱Z70VA)中半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)比為8:1.抗血清效價為1:8000.利用雜交瘤技術(shù)獲得了兩株穩(wěn)定分泌ZER

2、單克隆抗體(以下簡稱單抗)的雜交瘤細胞株1C12和9B4.經(jīng)鑒定兩株單抗亞型均為IgG1,雜交瘤細胞染色體數(shù)目為95~102條,間接ELISA測定腹水效價為1:3.2×10<'5>,單抗分子量為151.8KD.該單抗與ZER同系物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的交叉反應(yīng)率分別為35.5﹪,47.4﹪,7.1﹪,73.0﹪,56.3﹪;與己烯雌酚、雌二醇、睪酮、克倫特羅的交叉反應(yīng)率均小于0.1

3、﹪.該細胞株體外傳代和凍存復(fù)蘇后抗體分泌穩(wěn)定.用方陣滴定法確定包被原最適工作濃度為0.5μg/ml,單抗最適稀釋倍數(shù)為1:5000,辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠IgG(以下簡稱酶標(biāo)二抗)最適稀釋倍數(shù)為1:5000.采用間接競爭ELISA方法建立檢測ZER的標(biāo)準(zhǔn)曲線,在0.5ng/m1~100ng/ml范圍內(nèi)呈線性相關(guān),回歸方程為y=-66.844x+424.15,相關(guān)系數(shù)R<'2>=0.996,50﹪抑制濃度(IC<,50>)為3.0ng/

4、ml,以10﹪抑制率對應(yīng)的濃度計算,則該方法對ZER的檢測限為0.6ng/ml.以該單抗為基礎(chǔ),進行牛尿中玉米赤霉醇酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的研制.確定了試劑盒中各種溶液的配方.試劑盒最低檢測限為0.60ng/ml,試劑盒對空白牛尿的最低檢測限為7.74ng/ml.以10ng/ml, 21ng/ml,35ng/ml 3個濃度添加空白牛尿,回收率在70.0﹪~116.0﹪之間,板內(nèi)變異系數(shù)在6.0﹪~15.9﹪之間,批內(nèi)變異系數(shù)為15.3﹪,批