喹諾酮類獸藥多殘留酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、本文對動物性食品中喹諾酮類藥物多殘留的直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。選擇4種喹諾酮類藥物諾氟沙星(Norfloxacin，NOR)、環(huán)丙沙星(Cipfloxaxin，CIP)、沙拉沙星(Sarafloxacin，SAR)、氧氟沙星(Ofloxacin，OFL)用活化酯法與BSA偶聯(lián)制備人工免疫原，通過免疫純化獲得廣譜的抗喹諾酮藥物多克隆抗體OFL-B和NOR-B，優(yōu)化了抗體包被量、酶標(biāo)抗原量、封閉液、封閉時間和競爭時間，建立

2、了OFL-B和NOR-B抗體的直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法，OFL-B抗體可以同時檢測氧氟沙星、麻保沙星、氟羅沙星3種喹諾酮類藥物的殘留，NOR-B抗體可以同時檢測16種喹諾酮類藥物的殘留，對所建立的方法的各種性能指標(biāo)進(jìn)行了系統(tǒng)評價，考察了定量限、方法檢測限、準(zhǔn)確度、精密度。OFL-B抗體所建立的直接競爭酶聯(lián)免疫法的靈敏度為0.20 ng/mL，檢測限為0.02ng/mL，以牛奶為例，研究了牛奶基質(zhì)影響的消除方法，1mL牛奶加入2mL7.5

3、％三氯乙酸，離心，用PBS稀釋70倍即可有效消除基質(zhì)影響，測定了200、100、50、20、10 ng/mL五個濃度的添加回收率，回收率在78-113％之間，可用來同時檢測氧氟沙星、麻保沙星、氟羅沙星三種喹諾酮類藥物;通過高效液相色譜法，對建立的氧氟沙星的直接競爭酶聯(lián)免疫法的準(zhǔn)確性進(jìn)行了驗證，兩種方法的檢測結(jié)果一致性很高，說明所建立的直接競爭酶聯(lián)免疫法準(zhǔn)確可靠。同時，NOR-B抗體所建立的直接競爭酶聯(lián)免疫法的靈敏度為0.73 ng/mL