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文檔簡介
1、本文對動物性食品中喹諾酮類藥物多殘留的直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法進行了系統(tǒng)的研究。選擇4種喹諾酮類藥物諾氟沙星(Norfloxacin,NOR)、環(huán)丙沙星(Cipfloxaxin,CIP)、沙拉沙星(Sarafloxacin,SAR)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)用活化酯法與BSA偶聯(lián)制備人工免疫原,通過免疫純化獲得廣譜的抗喹諾酮藥物多克隆抗體OFL-B和NOR-B,優(yōu)化了抗體包被量、酶標抗原量、封閉液、封閉時間和競爭時間,建立
2、了OFL-B和NOR-B抗體的直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法,OFL-B抗體可以同時檢測氧氟沙星、麻保沙星、氟羅沙星3種喹諾酮類藥物的殘留,NOR-B抗體可以同時檢測16種喹諾酮類藥物的殘留,對所建立的方法的各種性能指標進行了系統(tǒng)評價,考察了定量限、方法檢測限、準確度、精密度。OFL-B抗體所建立的直接競爭酶聯(lián)免疫法的靈敏度為0.20 ng/mL,檢測限為0.02ng/mL,以牛奶為例,研究了牛奶基質影響的消除方法,1mL牛奶加入2mL7.5
3、%三氯乙酸,離心,用PBS稀釋70倍即可有效消除基質影響,測定了200、100、50、20、10 ng/mL五個濃度的添加回收率,回收率在78-113%之間,可用來同時檢測氧氟沙星、麻保沙星、氟羅沙星三種喹諾酮類藥物;通過高效液相色譜法,對建立的氧氟沙星的直接競爭酶聯(lián)免疫法的準確性進行了驗證,兩種方法的檢測結果一致性很高,說明所建立的直接競爭酶聯(lián)免疫法準確可靠。同時,NOR-B抗體所建立的直接競爭酶聯(lián)免疫法的靈敏度為0.73 ng/mL
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